厦门医学脑定位膜片钳研究方案

膜片钳技术被称为研究离子通道的“金标准”。是研究离子通道的较重要的技术。目前膜片钳技术已从常规膜片钳技术（Conventionalpatchclamptechnique）发展到全自动膜片钳技术（Automatedpatchclamptechnique）。传统膜片钳技术每次只能记录一个细胞（或一对细胞），对实验人员来说是一项耗时耗力的工作，它不适合在药物开发初期和中期进行大量化合物的筛选，也不适合需要记录大量细胞的基础实验研究。全自动膜片钳技术的出现在很大程度上解决了这些问题，它不只通量高，一次能记录几个甚至几十个细胞，而且从找细胞、形成封接、破膜等整个实验操作实现了自动化，免除了这些操作的复杂与困难。这两个优点使得膜片钳技术的工作效率很大程度提高了！签于全自动膜片钳技术的这些优点，目前已经普遍的用于药物筛选。膜片钳的应用：在通道电流记录中，可分别于不同时间、不同部位施加各种浓度的药物来研究。厦门医学脑定位膜片钳研究方案

膜片钳技术之全细胞记录的优点：与传统的细胞内记录相比，全细胞记录也有很多好处，比如电极尖锐端开口较大，电阻只2~20MΩ，易于进行电压/电流钳制，噪声很大程度下降，电极电压降也变得很小，补偿非常容易。与单通道记录相比，单通道记录无法获得整个细胞的功能变化信息，而全细胞记录（尤其是脑片或在体记录）所获信息则能反映细胞功能（甚至细胞之间信息传递）的改变，加之易于更换细胞外液，所以，全细胞记录更适用于对离子通道的药理学研究，即加各种通道blocker啦，激动剂啦之类的。南京细胞生物学膜片钳全细胞记录方案使用膜片钳全细胞记录技术观察拮抗剂对烟碱受体激动剂量效曲线的影响，来确定其作用的动力学特征。

全细胞膜片钳模式下有电压钳记录和电流钳记录两种。电压钳记录的原理与电压钳技术相似，但有所不同：首先，全细胞电压钳记录只使用单根电极，但在电学效果上同时实现了电压钳制和电流记录。其次，电压钳记录的电极不细胞，对细胞造成的损伤较小，因而能用于小细胞如神经元的研究。电流钳记录则是通过钳制电极电流来测量膜电位。电流钳在本质上也是电压钳位，它将差分放大器的输出电流与指令电流相比较，然后将这个差动输出施加到放大器前级的倒相端，通过高速反馈使得同相端的电压与其相等，无论电极电流是否为零，都能从输出电压得到膜电位的准确数值。

膜片钳技术是一种记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上离子通道分子活动的技术。是用来研究单个离体的活细胞、组织切片或细胞膜片离子流的电生理实验技术。这项技术在可兴奋细胞如神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺细胞的研究中起至关重要的作用，也可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。传统膜片钳技术对实验人员的技术要求非常高，一般地，实验人员需要经过严格的长期的训练，才能准确且快速的操作。膜片钳技术是用于纪录全细胞或个别细胞膜上离子信道电生理特性的研究方法膜片钳技术的应用范围：膜片钳技术在通道中的研究。

膜片钳技术的基本原理和方法：膜片钳使用的基本方法是，把经过加热抛光的玻璃微电极在液压推进器的操纵下，与清洁处理过的细胞膜形成高阻抗封接，导致电极内膜片与电极外的膜在电学上和化学上隔离起来，由于电性能隔离与微电极的相对低电阻（1～5MΩ），只要对微电极施以电压就能对膜片进行钳制，从微电极引出的微小离子电流通过高分辨、低噪声、高保真的电流-电压转换放大器输送至电子计算机进行分析处理。膜片钳技术实现的关键是建立高阻抗封接，并能通过特定的记录 仪器 反映这些变化。膜片钳的应用：对单细胞形态与功能关系的研究。厦门医学脑定位膜片钳研究方案

膜片钳使用操作注意：电热加热线温度很高，在使用时注意避免烫伤。厦门医学脑定位膜片钳研究方案

膜片钳技术是用于纪录全细胞或个别细胞膜上离子信道电生理特性的研究方法，目的在于提供基础研究知识与新药开发时研究细胞电特性或小分子药物对细胞膜上离子信道特性的影响，替开发标靶药物提供一个测试平台。传统的细胞培养膜片钳系统由人工操作，实验人员在取得元代细胞(例如心肌细胞与神经元)后，将研究对象细胞养在玻片上，以手动方式将纪录电极移动放置在胞体上方并压到细胞膜上，此时纪录电极在膜外溶液里的电阻大约为3-9 ΜΩ。厦门医学脑定位膜片钳研究方案

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