宏全基因组高通量测序

时间:2022年08月26日 来源:

AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)是一种小分子染料,可以通过完整的细胞膜,嵌入所有细胞(活细胞和死细胞)的细胞核,呈现绿色荧光;碘化丙啶(PI)只能通过不完整的细胞膜,即死细胞的细胞膜,嵌入所有死细胞的细胞核,呈现红色荧光,通过标记出的绿色荧光和红色荧光就可以辨别出活细胞和死细胞,这种特异性染色的方法也可以排除无核细胞、杂质、碎片等的干扰。荧光细胞计数仪检测结果可以让我们直观的看到:细胞浓度(总细胞,活细胞,死细胞)、细胞存活率(台盼蓝和双荧光AO/PI染色)、细胞平均直径、细胞聚团率、细胞直径分布等结果的展示。生工生物已开展10x单细胞转录组测序(scRNA-seq)服务,如果正好您有需要,那就快快来call我们吧!宏全基因组高通量测序

怎样通过血球计数板进行质检操作呢?将血球计数板擦拭干净,取干净的盖玻片盖在计数板上;将细胞悬液混匀(或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液),吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间;在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数;按细胞计数公式进行计算,计算公式:细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数,V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目,细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。上海地区宏基因组高通量测序原理使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。

通过显微镜使用血球计数板质检能观察到悬液背景质量和细胞数目及活性的评估。让我们再来回顾一下台盼蓝染色原理:台盼蓝染色原理:台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高,可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。怎样通过血球计数板进行质检操作呢?将血球计数板擦拭干净,取干净的盖玻片盖在计数板上;将细胞悬液混匀(或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液),吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间;在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数;按细胞计数公式进行计算,计算公式:细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数,V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目,细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。

对于微生物样品,请客户如实声明所属物种;对于可能致病的微生物,生工将拒收。以固体培养基培养的样品,需将样品从培养基上刮取下来,用干冰寄送;以液体培养基培养的样品,需离心后弃培养液收集样品,用RNA组织保存液(例如RNA-Be-Locker A)保存,以干冰或冰袋寄送;没有RNA组织保存液的情况下,也可用液氮或干冰乙醇速冻,保存于-80°C 冰箱,埋于足量干冰寄送。***样品送样量需至少达到100 mg/样;细菌样品送样量需至少达到107(10的7次方)数量级,同时,在与样本一同寄送的送样表上,标明属于革兰氏阳性菌(G+)还是革兰氏阴性菌(G-)。小RNA测测序不可采用常规柱式总RNA提取试剂盒。

简化基因组测序,项目介绍:通过限制性内切酶对基因组DNA进行酶切,并对酶切片段进行高通量测序,这种通过酶切降低基因组的复杂度的测序技术统称为简化基因 组测序技术。利用生物信息学方法,进行SNP单体型图谱绘制,全基因组关联分析(GWAS),连锁分析和QTL定位分析,种群进化,主成分分析等。比较有代表性的方法有GBS-seq和RAD-seq。宏全基因组测序,项目介绍:宏基因组指特定环境样品内全部遗传物质的总和。直接提取环境样品内全部基因组DNA,随后进行大规模高通量测序(shotgun 策 略)。测到数据后,先进行必要的数据质控,而后进行基因组拼接、注释(物种、基因功能),使得我们可以获取环境样品内菌群分布、系统进化、功能代谢等信息。该方法已经得到普遍的运用。寄送RNA样品请置于1.5 ml离心管中,管上注明样品名称、浓度以及制备时间,管口使用Parafilm封口。上海地区宏全基因组高通量测序平台

生工生物接受客户自备文库测序项目。宏全基因组高通量测序

样本寄送时,请将填写完整的纸质版《高通量测序送样表》密封于塑料袋内,随样本一起寄出,纸质版的样本信息单用于样本接收人员在收到样本后及时并正确的保存并录入样本,如无纸质版的样本信息单可能会延误项目周期;样本管壁或管盖上标明的样本名称需要与《高通量测序送样表》里样本名称一致,这样可以避免我们收到样本后与您确认样本编号而耽误样本质检、提取实验;如有特殊情况,请在《高通量测序送样表》中注明;样品编号请避免使用中文、罗马数字、“-”以及特殊符号标示,避免分析的时候系统无法识别,导致分析无法完成;我们分析人员建议编号可以采用英文字母与阿拉伯数字结合的形式,字符比较好不要过长,避免绘制部分分析图的时候难以全部展示。宏全基因组高通量测序

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