多重扩增高通量测序技术

使用显微镜进行悬液质检操作时应注意：1.使用血球计数板时，可以提前镜检观察每小格计数室内是否洁净无杂质。若有杂质灰层，则需要多次清洗，直至计数室洁净无瑕；2.质检前将悬液轻微震荡或使用扩口***头吹打混匀；3.台盼蓝染色后需要尽快完成细胞计数，一般建议不要超过10分钟；4.如果方格中细胞数目过多，难以数清，应当对细胞悬液进行稀释以便于计数；5.对于压在方格界线上的细胞应当计数同侧相邻两边上的细胞数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。寄送RNA样品请置于1.5 ml离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用Parafilm封口。多重扩增高通量测序技术

对于用RNA组织保存液寄送的样品，请按照RNA组织保存液说明保存和寄送。请注意：1)样品浸入组织保存液之前，对于动物组织样品，须以建议快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块；对于植物样品，须以建议快速度将样品剪切成厚度小于0.3cm的碎块。2)鼠肝、肾和脾等小organ样品和没有蜡质保护层的植物样品可不剪切直接放入保存液中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。3)确保将样品完全浸泡在保存液中，不让其粘贴在管壁和盖上。上海市羟甲基化测序高通量测序服务近年来，随着高通量测序技术的发展和普及，单细胞测序技术发展十分迅速。

扩增子测序，项目介绍：随着基因编辑技术（尤其是CRISPR-cas9技术）的发展，科研人员使用传统的Sanger测序技术无法快速有效鉴定基因编辑效率。但是，通过对靶基因区域附近设计引物，进行PCR扩增，并对PCR产物进行高通量测序，可以快速高效的获得目标区域的突变频率信息，尤其是对低频突变的检测效果远远优于一代测序，性价比极高。16S全长分类测序，项目介绍：16S全长测序分析主要是对 16S rRNA基因全长进行扩增，基于PacBio 测序平台测序. 相比较二代测序只选择 1-2 个高变区进行测序，三代可以获得全长的 16S 序列，更多变异区信息可以提高物种鉴定的分辨率，还可以提高对于群落组成的鉴定的精度。另外，针对fungus/真核生物，也可以采用类似的办法，扩增ITS/18S全长，进行物种分类测序，提高鉴定精度。

对于微生物样品，请客户如实声明所属物种；对于可能致病的微生物，生工将拒收。以固体培养基培养的样品，需将样品从培养基上刮取下来，用干冰寄送；以液体培养基培养的样品，需离心后弃培养液收集样品，用RNA组织保存液（例如RNA-Be-Locker A）保存，以干冰或冰袋寄送；没有RNA组织保存液的情况下，也可用液氮或干冰乙醇速冻，保存于-80°C 冰箱，埋于足量干冰寄送。***样品送样量需至少达到100 mg/样；细菌样品送样量需至少达到107（10的7次方）数量级，同时，在与样本一同寄送的送样表上，标明属于革兰氏阳性菌（G+）还是革兰氏阴性菌（G-）。DNA样品建议用蓝冰运输。

核酸适配体测序，项目介绍：核酸适配体是一类能够特异性地和靶物质结合的寡核苷酸序列。它可作用于蛋白质、金属离子、小分子化合物、细胞膜表面受体等靶标。其结合能力可与抗体相当甚至更强，同时具有低免疫原性、 稳定性好等特点，并可结合各种药物及载体构建多元复合靶向给药系统用于tumour靶向treat, 在生物医学领域有潜在高价值。生工生物针对核酸适配体特殊结构，结合Illumina MiSeq测序平台，可以快速对核酸适配体文库进行大规模高通量测序，省去克隆测序的麻烦，提高测序深度，快速计算适配体序列频率，方便科研客户快速评估序列富集程度。请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。上海羟甲基化测序高通量测序NGS

RNA样品请用1.5 mL离心管装好并用封口膜封好，并安置于50 mL离心管内或其他类似容器里，并旋紧盖子。多重扩增高通量测序技术

KBSeq全质粒测序跟一代测序相比有什么优点呢？一代测序：1.数据质量，套峰，双峰等情况，需要人工分析校对。2.测序长度，1 kb。3.成本，低。4.样本用量，100 ng。5.精确度，70-90%。6.测序能力，需要测序引物，只能测测序引物间的片段序列。7.通量低，（与读长有关）。8.实验周期，如果片段长度超过5K，测通可能需要15天左右。对于测序长度较长，如果我们用Sanger测序往往需要花费大量的时间，而我们KBSeq全质粒测序则只需要5-7天，就可以测通片段长度小于30kb以下的片段。KBSeq全质粒测序对于样本的量，要求的也比较少，比如质粒我们的样本要求DNA的浓度需≥ 1 ng/μl, 体积需≥5 μl，如果比较珍贵的样本或者是样本比较难提取的，KBSeq就更为适合了。多重扩增高通量测序技术

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