上海宏基因组高通量测序NGS

时间:2022年09月21日 来源:

全基因组测序是对未知基因组序列的物种进行个体的基因组测序,其研究主要包括3个方面:第一种为不参考任何现有序列从头组装测序,是对未知基因组序列的物种进行基因组测序,并综合利用不同测序技术和生物信息学工具对研究物种进行序列拼接和修正,进而获得该物种的基因组序列图谱;第二种为常见的全基因组重测序,是对已知基因组序列的物种进行个体或群体的测序研究,建立一个测序文库进行单个个体或不同个体混合池测序,发现遗传变异标记,进行后续的研究;第三种是在已有参考基因组序列图谱的基础上,对不同品种的具有代表性个体建立多个文库进行全基因组从头组装测序,此方法能够进一步的进行参考基因组的修补和发现短序列比对难以发现的遗传变异。生工生物拥有众多生物信息分析人才,可进行专业的项目分析,为客户提供个性化服务。在运输前将所有样品管固定于50 ml带盖离心管中,再将50 ml管放在封口袋中。上海宏基因组高通量测序NGS

RNA样品:1.请务必提供每个样品具体的浓度、体积、制备时间以及物种来源。比较好附上电泳胶图或者 Agilent Bioanalyzer 仪器检测数据等;2.对于普通转录组样品,请提供浓度≥100 ng/µl、总量≥2 µg 的总 RNA 样品,样品请去蛋白并进行 DNase处理;一般情况下,普通转录组测序需要 RNA 样品的 OD260/OD280为 2.0~2.2,Agilent Bioanalyzer 2100 器检测获得的总RNA 28S:18S≥1,RIN≥8;对于全长转录组测序样品(ISO-seq),请提供浓度大于200 ng/ul,总量大于5 μg的总RNA样品。样品请去蛋白并进行 DNase 处理;全长转录组测序需要 RNA 样品的 OD260/OD280 为 2.0~2.2,2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器检测获得的总RNA 28S:18S≥1,RIN≥8.5;上海市无参转录组高通量测序平台一台10xGenomics Chromium X仪器能够在单次运行中分析数百至数十万个细胞,让百万级的细胞研究变得常规。

RNA类高通量测序样品要求:对于需要进行 RNA 抽提的样品,请使用新鲜取样的实验材料,当场分成小块(动物样品厚度需小于0.5 cm,植物样品厚度需小于0.3 cm)后立即用液氮或干冰乙醇速冻,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰(根据经验,在秋冬季节,如果打包合适,5 公斤块状干冰可以维持 50 小时,而小块的干冰能更好的包裹样品,但需比块状干冰多加些)中用保温箱寄送。一般组织样品,送样量至少200 mg/样;如果样品属于孢子,送样量至少500 mg/样。

悬液制备好后质检结果的判断也是大家需要掌握的必备技能。单细胞悬液质检关卡究竟是怎样运作的呢?单细胞悬液质控要求:•细胞浓度:700-1200cells/µl;•细胞活率>80%(当细胞悬液活率低于70%时建议进行去除死细胞处理);细胞团及碎片杂质<5%(无细胞粘连,无明显的细胞碎片和细胞团,并保证细胞的完整性);•细胞状态:细胞直径在7-40um之间(细胞直径过大则建议进行抽核处理);•不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。目前,生工生物已开展10x单细胞转录组测序(scRNA-seq)服务,如果正好您有需要,那就快快来call我们吧!

2021年11月1日,在这个平凡而又特殊的日子里,生工生物高通量测序部迎来了一位新成员——10xGenomics Chromium X!不要看我们个头小,我们可是百万级单细胞捕获神器吆。X是如何实现单次运行有这么高的吞吐量呢?多通道+高捕获+10x的CellPlex多样本混样技术。X仪器本身有16个通道(Controller为8通道),每个通道比较多捕获20000个细胞(Controller为10000个细胞)。再结合10x的CellPlex多样本混样技术,每个通道比较多可捕获60,000个细胞,去除双细胞率后,每张芯片比较多可捕获750,000个单细胞。RNA样品建议用足量干冰运输。上海宏基因组高通量测序NGS

PacBio Sequel/RSII 该测序平台主要承接细菌基因组完成图测序、fungus基因组精细图测序、全长转录本测序服务。上海宏基因组高通量测序NGS

为什么要用单细胞测序技术?细胞是生物体结构和功能的基本单位,在生物体生长发育的过程中,因细胞类型、外界环境以及内部调节因素的不同,其转录组信息也不尽相同。由于基因组和表观遗传的重编程,以及在细胞分裂和分化过程中出现的误差造成来自同一细胞系或个体的细胞呈现出不同的基因组、转录组和表观基因组[4]。这就是我们上面提到的细胞异质性。细胞异质性是生物组织和生物系统的普遍特征[5]。但是我们常规的二代测序检测的是一个细胞群体的基因组、转录组的信息,如培养的大量细胞、动植物组织甚至是整个生物体。在过去的20多年中,人们对转录组的人数仍然局限在群体水平[6]。这种方法可以为我们提供大量的基因组或转录组数据,却无法揭示细胞的异质性。传统方法得到的是细胞群的平均基因组,而单细胞测序测量的是细胞群中单个细胞的基因组[7]。现在也有学者为了区分传统测序和单细胞测序的区别,将传统方法称为批量测序。上海宏基因组高通量测序NGS

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