上海高通量测序原理

为什么要用单细胞测序技术？细胞是生物体结构和功能的基本单位，在生物体生长发育的过程中，因细胞类型、外界环境以及内部调节因素的不同，其转录组信息也不尽相同。由于基因组和表观遗传的重编程，以及在细胞分裂和分化过程中出现的误差造成来自同一细胞系或个体的细胞呈现出不同的基因组、转录组和表观基因组[4]。这就是我们上面提到的细胞异质性。细胞异质性是生物组织和生物系统的普遍特征[5]。但是我们常规的二代测序检测的是一个细胞群体的基因组、转录组的信息，如培养的大量细胞、动植物组织甚至是整个生物体。在过去的20多年中，人们对转录组的人数仍然局限在群体水平[6]。这种方法可以为我们提供大量的基因组或转录组数据，却无法揭示细胞的异质性。传统方法得到的是细胞群的平均基因组，而单细胞测序测量的是细胞群中单个细胞的基因组[7]。现在也有学者为了区分传统测序和单细胞测序的区别，将传统方法称为批量测序。使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。上海高通量测序原理

生工高通量测序样品要求，RNA样品：请提供浓度≥750 ng/μl、总量≥2μg的总RNA样品，样品请去蛋白并进行DNase处理;请务必提供每个样品具体的浓度、体积、制备时间以及物种来源。比较好附上QC数据，可以是电泳胶图、分光光度值、Nanodrop仪器检测数据或者Agilent Bioanalyzer仪器检测数据等;一般情况下，转录组测序需要Agilent Bioanalyzer仪器检测获得的总RNA 28S:18S≥1，RIN≥7;小RNA测测序不可采用常规柱式总RNA提取试剂盒，可选择传统总RNA提取法（如乙醇沉淀、异丙醇沉淀等）或者选用专门的小RNA提取试剂盒;寄送RNA样品请置于1.5 ml离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用Parafilm封口。在运输前将所有样品管固定于50 ml带盖离心管中，再将50 ml管放在封口袋中。使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。上海单细胞测序高通量测序平台生工生物已开展10x单细胞转录组测序（scRNA-seq）服务，如果正好您有需要，那就快快来call我们吧！

台盼蓝染色原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果：明场（细胞未染色）：主要可以观察悬液背景质量（背景干净，无杂质碎片，无细胞团块）；台盼蓝场（细胞与台盼蓝染色后）：主要可以观察活性（主要为活细胞，未染色蓝色的为活细胞）；通过台盼蓝场计算活率：90%>80%；细胞浓度:710cells/µl;等结果来看，血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准，属于高质量单细胞悬液。

生工人、大、小鼠全基因组测序，项目介绍：人或者大、小鼠全部基因组重测序，研究其突变信息（包括SNP/InDel/CNV/SV），并注释突变位点信息。该技术可同时获取编码区及非编码区突变信息，被广泛应用于遗传病、tumour及其它其它疾病研究中。测序平台：HiSeq XTen平台进行PE150测序。生工微生物基因组测序，项目介绍：微生物基因组重测序（有参）目前越来越多的微生物基因组被解析出来了。从而使得科研工作者们可以对某些物种微生物进行进行物种进化、种群特征、选择压力等研究。利用高通量测序技术，对有参考基因组微生物进行多个体的基因组重测序，精细分析其与参考基因组的SNP、InDel、SV等变异信息。寄送 RNA 样品请置于 1.5 ml 离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用 Parafilm 封口。

怎样通过血球计数板进行质检操作呢？将血球计数板擦拭干净，取干净的盖玻片盖在计数板上；将细胞悬液混匀（或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液），吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间；在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数；按细胞计数公式进行计算，计算公式：细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数，V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目，细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。在运输前将所有样品管固定于50 ml带盖离心管中，再将50 ml管放在封口袋中。上海羟甲基化测序高通量测序项目

KBSeq全质粒测序对于样本的量，要求的也比较少。上海高通量测序原理

扩增子测序，项目介绍：随着基因编辑技术（尤其是CRISPR-cas9技术）的发展，科研人员使用传统的Sanger测序技术无法快速有效鉴定基因编辑效率。但是，通过对靶基因区域附近设计引物，进行PCR扩增，并对PCR产物进行高通量测序，可以快速高效的获得目标区域的突变频率信息，尤其是对低频突变的检测效果远远优于一代测序，性价比极高。16S全长分类测序，项目介绍：16S全长测序分析主要是对 16S rRNA基因全长进行扩增，基于PacBio 测序平台测序. 相比较二代测序只选择 1-2 个高变区进行测序，三代可以获得全长的 16S 序列，更多变异区信息可以提高物种鉴定的分辨率，还可以提高对于群落组成的鉴定的精度。另外，针对fungus/真核生物，也可以采用类似的办法，扩增ITS/18S全长，进行物种分类测序，提高鉴定精度。上海高通量测序原理

生工生物工程（上海）股份有限公司是一家有着先进的发展理念，先进的管理经验，在发展过程中不断完善自己，要求自己，不断创新，时刻准备着迎接更多挑战的活力公司，在上海市等地区的医药健康中汇聚了大量的人脉以及**，在业界也收获了很多良好的评价，这些都源自于自身不努力和大家共同进步的结果，这些评价对我们而言是比较好的前进动力，也促使我们在以后的道路上保持奋发图强、一往无前的进取创新精神，努力把公司发展战略推向一个新高度，在全体员工共同努力之下，全力拼搏将共同生工生物工程供应和您一起携手走向更好的未来，创造更有价值的产品，我们将以更好的状态，更认真的态度，更饱满的精力去创造，去拼搏，去努力，让我们一起更好更快的成长！