上海地区多重PCR高通量测序项目

时间:2022年10月14日 来源:

转录组测序,项目介绍:RNA-Seq,是基于新一代测序技术的转录组学研究方法:首先提取生物样品的全部转录的 RNA 并进行 mRNA 富集,然后反转录为 cDNA 后进行新一代高通量测序,在此基础上进行短片段拼接组装,从而获得一个个单独转录本,进而可以对该生物样品当前状态的基因表达状况有全局了解。对不同阶段或部位生物样品的转录组进行 比较分析,则可以在转录层面得到基因表达水平的变化,针对关键基因则可以进行代谢通路(Pathway)的构建。单细胞测序技术可以检测复杂组织中单个细胞不同的生物学特性.上海地区多重PCR高通量测序项目

真核/原核有参mRNA-Seq,项目介绍:转录组(transcriptome)广义上指某一生理条件下,细胞内所有转录产物的gather,狭义上指所有mRNA的gather。转录组是研究基因表达的主要手段,是连接基因组遗传信息与生物功能的蛋白质组的纽带。转录水平的调控是生物体重要的调控方式,通过转录组测序分析转录水平的调控,是目前运用较多的研究方式。测序使用Illumina Xten平台,测序原始数据经过质控后,mapping至参考基因组序列,对mapping到基因上的reads进行计数,计算基因的表达量后,进行基因表达差异及差异基因GO、KOG(原核生物为COG)、KEGG功能富集分析,KEGG pathway等分析。对于多个样本,可进行重复相关性检查、共表达分析、PCA主成分分析。另外,依据参考基因组,可进行诸如基因覆盖度、测序饱和度等验证性分析;可变剪切分析、SNP/InDel分析、新转录本预测以及联合miRNA数据进行关联分析等分析。另外,还可以进行基因功能互作、蛋白网络互作等分析,深入研究基因功能,进一步揭示基因间互作网络等信息,为研究网络调控机理提供方向。宏全基因组高通量测序产品寄送 RNA 样品请置于 1.5 ml 离心管中,管上注明样品名称、浓度以及制备时间,管口使用 Parafilm 封口。

RNA样品:1.请务必提供每个样品具体的浓度、体积、制备时间以及物种来源。比较好附上电泳胶图或者 Agilent Bioanalyzer 仪器检测数据等;2.对于普通转录组样品,请提供浓度≥100 ng/µl、总量≥2 µg 的总 RNA 样品,样品请去蛋白并进行 DNase处理;一般情况下,普通转录组测序需要 RNA 样品的 OD260/OD280为 2.0~2.2,Agilent Bioanalyzer 2100 器检测获得的总RNA 28S:18S≥1,RIN≥8;对于全长转录组测序样品(ISO-seq),请提供浓度大于200 ng/ul,总量大于5 μg的总RNA样品。样品请去蛋白并进行 DNase 处理;全长转录组测序需要 RNA 样品的 OD260/OD280 为 2.0~2.2,2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器检测获得的总RNA 28S:18S≥1,RIN≥8.5;

对于用RNA组织保存液寄送的样品,请按照RNA组织保存液说明保存和寄送。请注意:1)样品浸入组织保存液之前,对于动物组织样品,须以建议快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块;对于植物样品,须以建议快速度将样品剪切成厚度小于0.3cm的碎块。2)鼠肝、肾和脾等小organ样品和没有蜡质保护层的植物样品可不剪切直接放入保存液中保存,有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。3)确保将样品完全浸泡在保存液中,不让其粘贴在管壁和盖上。特别申明:不能采用过柱离心的方法提取总RNA。

扩增子测序,项目介绍:随着基因编辑技术(尤其是CRISPR-cas9技术)的发展,科研人员使用传统的Sanger测序技术无法快速有效鉴定基因编辑效率。但是,通过对靶基因区域附近设计引物,进行PCR扩增,并对PCR产物进行高通量测序,可以快速高效的获得目标区域的突变频率信息,尤其是对低频突变的检测效果远远优于一代测序,性价比极高。16S全长分类测序,项目介绍:16S全长测序分析主要是对 16S rRNA基因全长进行扩增,基于PacBio 测序平台测序. 相比较二代测序只选择 1-2 个高变区进行测序,三代可以获得全长的 16S 序列,更多变异区信息可以提高物种鉴定的分辨率,还可以提高对于群落组成的鉴定的精度。另外,针对fungus/真核生物,也可以采用类似的办法,扩增ITS/18S全长,进行物种分类测序,提高鉴定精度。请提供电泳胶图,浓度>20 ng/μl,总量一般1~2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA,可冰袋运输,不超过3天。上海市微生物高通量测序公司

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