上海small RNA高通量测序技术

细胞质检时染料染色的原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一种小分子染料，可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；碘化丙啶（PI）只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光，通过标记出的绿色荧光和红色荧光就可以辨别出活细胞和死细胞，这种特异性染色的方法也可以排除无核细胞、杂质、碎片等的干扰。RNA样品建议用足量干冰运输。上海small RNA高通量测序技术

AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一种小分子染料，可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；碘化丙啶（PI）只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光，通过标记出的绿色荧光和红色荧光就可以辨别出活细胞和死细胞，这种特异性染色的方法也可以排除无核细胞、杂质、碎片等的干扰。荧光细胞计数仪检测结果可以让我们直观的看到：细胞浓度（总细胞，活细胞，死细胞）、细胞存活率（台盼蓝和双荧光AO/PI染色）、细胞平均直径、细胞聚团率、细胞直径分布等结果的展示。上海市羟甲基化测序高通量测序原理DNA样品请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。

如果你的样品是质粒或者是菌液，那为什么不试试我们的KBSeq呢？准确、迅速，可以说是KBSeq的代名词了，关键是还可以省钱，估计这是很多小伙伴们一定会说，你这个服务单价可比Sanger贵多了，怎么可能会省钱呢？Sanger测序的价格：常规的一代测序基本上要每800 bp就测一个反应，那我们来算一下14000/800=17.5，那基本上就要测18个反应了，按照现在生工官方的价格区间，这个属于反应数在10-49个反应之间的，那每个反应的价格为26元，这样算下来18*26=468元，还要加上引物合成的费用，实验周期的话大概率是要超过15天的。KBSeq全质粒测序的价格：序列长度属于6-15 kb之间，159元，实验的周期大概在5-7天左右。

RNA样品：1.请务必提供每个样品具体的浓度、体积、制备时间以及物种来源。比较好附上电泳胶图或者 Agilent Bioanalyzer 仪器检测数据等；2.对于普通转录组样品，请提供浓度≥100 ng/µl、总量≥2 µg 的总 RNA 样品，样品请去蛋白并进行 DNase处理；一般情况下，普通转录组测序需要 RNA 样品的 OD260/OD280为 2.0~2.2，Agilent Bioanalyzer 2100 器检测获得的总RNA 28S:18S≥1，RIN≥8；对于全长转录组测序样品（ISO-seq）,请提供浓度大于200 ng/ul，总量大于5 μg的总RNA样品。样品请去蛋白并进行 DNase 处理；全长转录组测序需要 RNA 样品的 OD260/OD280 为 2.0~2.2，2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器检测获得的总RNA 28S:18S≥1，RIN≥8.5；关键是KBSeq还可以省钱。

微生物基因组重测序（有参）：目前越来越多的微生物基因组被解析出来了。从而使得科研工作者们可以对某些物种微生物进行进行物种进化、种群特征、选择压力等研究。利用高通量测序技术，对有参考基因组微生物进行多个体的基因组重测序，精细分析其与参考基因组的SNP、InDel、SV等变异信息。微生物基因组从头测序（无参）：对于不断分离培养微生物的客户来说，要确定一个菌株是否是新菌株或者新菌种，较快捷的办法就是，直接进行基因组测序。利用高通量测序技术，对这些基因组进行高深度测序，然后进行基因组组装，获得基因组的框架图或者精细图甚至是完成图。从而可以快速解析其基因组结构、基因功能、进化关系。请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。上海高通量测序服务

RNA样品请用1.5 mL离心管装好并用封口膜封好，并安置于50 mL离心管内或其他类似容器里，并旋紧盖子。上海small RNA高通量测序技术

KBSeq全质粒测序跟一代测序相比有什么优点呢？一代测序：1.数据质量，套峰，双峰等情况，需要人工分析校对。2.测序长度，1 kb。3.成本，低。4.样本用量，100 ng。5.精确度，70-90%。6.测序能力，需要测序引物，只能测测序引物间的片段序列。7.通量低，（与读长有关）。8.实验周期，如果片段长度超过5K，测通可能需要15天左右。对于测序长度较长，如果我们用Sanger测序往往需要花费大量的时间，而我们KBSeq全质粒测序则只需要5-7天，就可以测通片段长度小于30kb以下的片段。KBSeq全质粒测序对于样本的量，要求的也比较少，比如质粒我们的样本要求DNA的浓度需≥ 1 ng/μl, 体积需≥5 μl，如果比较珍贵的样本或者是样本比较难提取的，KBSeq就更为适合了。上海small RNA高通量测序技术

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