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冻存（Cryo-preservation）是一个将细胞器，细胞，组织，细胞外基质，***或者任何其他的在没有经调控的化学动力学因素影响下容易受损的生物组成物，将他们通过迅速降低到非常低的温度来进行保存（通常是使用固态二氧化碳的营造-80°C条件或者是使用液氮的营造的-196°C条件）。在很低的温度下，任何的酶和可能会对生物材料造成伤害的化学活跃因素都因为温的环境从而有效地解决。。就冻存这样的方法而言，人们努力寻找一个合适的低温，这样的温度不会造成在结冰过程中的由于冰晶的形成从而导致细胞的附加伤害，这是冻存中的头等大事。细胞冻存液主要成分是什么?加多少细胞冻存液的ph

注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22micronFGLPTelflon过滤或是直接购买无菌产品，如SigmaD-2650)，以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。广州加完细胞冻存液 长期无血清快速细胞冻存液，不含动物来源的血清成分，能够有效提高细胞冻存活率和复苏活力.

3、取待冻存的细胞用胰蛋白酶消化（方法见细胞的传代部分）。用含血清的培养基将细胞冲洗下来，将细胞悬液吸到无菌离心管中，800r/min离心5min，弃上清，收集细胞沉淀。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。4、在沉淀中加入适量冻存液制成细胞悬液，细胞浓度宜大，300万/mL左右，一般一个中方瓶中的细胞浓缩至1mL，冻存液中为宜。5、细胞悬液装入冻存管中。用封口膜封裹瓶口，做好标记。6、冻存管在4℃下存放30min，转放-20℃中30min，再转入-70℃过夜，之后即可放入液氮中长久保存，注意进行登记。

一、细胞冷冻保存1.材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(SigmaD-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene5000-0020)、0.4％（w/v）trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)2、冷冻保存方法：（1）传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。（2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。细胞冻存液比例是多少?

细胞冻存的操作步骤是什么配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；离心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的**终密度为5×106/ml～1×107/ml；将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5ml；在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。细胞冻存液避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。上海hela细胞冻存液是什么颜色

细胞冻存液无动物来源血清成分，化学成分明确。加多少细胞冻存液的ph

冻存细胞类型：人胚胎干（ES）和诱导多能干（iPS）细胞

① hES和hiPS细胞冻存液，用于以TeSRTM培养基培养的细胞

② 比使用血清冻存的传统方法复苏效率高1-4

③ FreSRTM-S（新品）不含动物源成分，且已经过优化用于以单细胞悬液的方式冻存细胞

冻存细胞类型：间充质干细胞（MSCs)

用于预先培养于MesenCultTM-XF或者MesenCultTM-ACF（新品）培养基中的人MSCs

解冻的MSCs具有较高的复苏效率、细胞成活率高、稳定性高可重复，且较好的保持了MSC的多能性和扩增能力 加多少细胞冻存液的ph