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cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。再说一下关于种板设置问题。众所周知周围一圈孔因为边缘效应都是不用来做实验的。一般每组样品我会设置6个复孔，得到的OD值去掉**大值与**小值，其余取平均值。我用的是排***，会省很多力气，但是也会增大组内误差。这个只有通过校正移液***和选用**适***头了。能力有限，表达不清的大家凑合着看看吧。有疑问的欢迎大家留言讨论，我们的目标是共同进步CCK-8用途：***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验.上海悬浮细胞 cck8

二、优点：·使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；·CCK-8法能快速检测；·CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；·CCK-8法的重复性优于MTT法，MTT实验生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有机溶剂溶解；而本方法产生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差；·CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取比较好测定时间，与MTT方法相比线性范围更宽，灵敏度更高；·CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。浙江cck8 dojindo该方法已被***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选以及药敏试验等。

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时

CCK8原理、优势和步骤 检测原理：

◆ Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

◆ WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。 生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比.

CCK-8的原理

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在***处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少，所以此时怎么算呢（此时我就比较怀恋中性红了）？当然也有解决的办法，下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析，在吸光度为450时检测读数。颜色也会越深 在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）.江苏cck8实验步骤

**药敏试验：这个是用的比较广的，我见过做**的团队，买CCK-8都是一整箱，一整箱的买。上海悬浮细胞 cck8

CCK8，即Cell Counting Kit-8，与MTT法的主要区别如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 试剂盒利用了日本同仁化学研究所（Dojindo）开发的四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。2、MTT法：其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。上海悬浮细胞 cck8