浙江cck8避光

当使用标准96孔板时，贴壁细胞的**小接种量至少为1000 个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500 个/孔(100μl培养基)。酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

注意事项CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。当在培养箱内培养时，培养板**外一圈的孔**容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，**外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。 加入CCK8那会空白对照组的细胞刚好长满吗？浙江cck8避光

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人**终采用的是后者。天津cck8英文用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

读数前可在摇床上温柔混匀，酶标仪在 450nm 波长处检测每孔的吸光度。

***率（％）= [（对照孔吸光度-实验孔吸光度）/（对照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事项

CCK8法检测细胞生长情况基于的原理是脱氢酶催化的反应，如果实验处理条件中存在还原剂的影响，应事先去除。如果实验条件中存在还原物质，需单独测定还原物质的空白吸光度。如果还原物质的吸光度很小，可以忽略不计；但如果吸光度很大，则需要去除培养基，再用培养基洗涤细胞3次，然后再加入新的 100ul培养基和10ul CCK-8 溶液进行检测。

实验原理：CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8.

CCK8实验操作CCK8的优势在于对细胞没有毒性，可以直接加入细胞中长时间孵育，而不用考虑试剂本身对细胞带来的影响。1、向96孔板中每孔加入细胞100ul，置于培养箱中孵育24小时，96孔板的排版情况和上述MTT相同，在这里不重复介绍了。2、向各孔中加入10ul的CCK-8检测溶液。如若检测的细胞增殖或毒性试验，需在此之前加入作用***培养适当时间，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8检测液。3、培养箱中孵育1～4小时，比较好反应时间以细胞具体显色程度为准。培养板周围一圈孔培养液容易挥发，为减少误差，建议培养板周围的四边每孔只加培养基。天津cck8英文

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。浙江cck8避光

培养板对CCK8测定的影响：不同公司的培养板，以及培养板是否经过处理对读数都有一定的影响。所以前后实验要一致。另外在培养箱中，培养板**外一圈的孔容易干燥挥发，从而能导致培养基的体积不一样，增加误差。如果有可能，**外一圈的孔只加高压灭菌的PBS或ddH2O。另外，注意CCK-8不要贴在板壁上。一定要注意是否是***有问题。解决的方案就是可以在测定CCK-8的读数前，换个细胞液，再测定。这样会有一定的影响，但是影响的是所有的，所以均一性还算比较好。浙江cck8避光