上海pei转染试剂原理

在难转染细胞（原代大鼠动脉平滑肌细胞）转染效率的比较

图片由芝加哥大学肺和重症护理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供

制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用 LipoD293™试剂（左图）和 Lipofecatmine 2000（L2K, 右图）分别将 GFP 的 cDNA（pEGFP-N3）按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染 24 小时后，用尼康 Eclipse 2000 荧光显微镜检测 GFP 荧光，以此来评价转染效率。

对难转染细胞 LNCap 细胞转染效率的比较

在难转染细胞（原代大鼠动脉平滑肌细胞）转染效率的比较

图片由罗斯威尔公园**研究所（Roswell Cancer Institute）

正确的了解您希望输送的运载物是选择可靠转染产品的第一步。上海pei转染试剂原理

用LipoD293™体外DNA转染试剂（Ver.II）（上图）和受欢迎的品牌产品Invitrogen公司的293fectin™（下图）转染pEGFP-C1质粒到HEK293细胞中。转染24小时后，细胞的尼康Eclipse荧光显微镜DIC成像图（左侧）和荧光成像图（右侧）。对悬浮HEK293F产生蛋白质效率的比较30毫升的293F细胞分别使用LipoD293™试剂、293fectin、Xfect和Fugene6等转染试剂按照生产商的标准转染步骤将pEGFP-6xHis质粒导入细胞表达，用量为LipoD293™试剂，20微克，所有其他三种转染试剂均使用30微克质粒DNA。上海转染试剂配方连续细胞系具有无限增殖的潜能，通常要比原代或有限细胞更易处理。

原代细胞直接分离自组织并在适当条件下增殖,因此，它们的形态学和生理特征和体内状态更为相似。但相对于连续细胞系，它们通常更难培养和转染。在经过***次传代培养之后，原代培养物变成了一种细胞系。源自于原代培养物的细胞系具有有限的寿命（即它们是有限细胞系），且随着传代的进行，具有比较高的生长能力的细胞逐渐占据支配地位，从而造成了细胞群内的基因型和表型接近一致的情形。相对来说，这一类细胞要比原代细胞使用起来更为方便，尤其是稳定转染的克隆传代。

图3. 用于转染的Invivofectamine 3.0试剂及RNAi复合物非常容易获得：只需简单地混合，并进行孵育（30min）、稀释、及注射即可。

高效、靶向敲低

在实验靶标中可观察到高达85%的敲低效果

图4. 使用Invivofectamine 3.0试剂可在单次静脉注射后即可在肝脏中实现靶向敲低。Invivofectamine 3.0试剂与靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA组成的复合物，以每千克小鼠体重1 mg(mg/kg)的注射量进行注射，**终靶向mRNA水平出现了高达85%的敲低（使用TaqMan分析对敲低进行评估）。 每孔培养体积均为100μL，细胞数目在105左右。

简介：

X-tremeGENE HP DNA转染试剂是一种高效的无动物源成分的低毒转染试剂，兼容含血清或不含血清的培养基，可用于转染各类真核细胞(包括昆虫细胞)以及多种难转染细胞系。

优势：

1.简单易用的多组分混合试剂，无动物源性成分，室温稳定。

2.高转染效率，对于原代细胞和使用其它试剂难转染的**细胞系有高转染效率。

3.使用细胞毒性低的试剂，结果相关性好.

图2. X-tremeGENE HP高效低毒的转染性能。通过X-tremeGENE HP和脂质体转染方法将GFP表达质粒转染至CHO-K1。A和C图的荧光视野显示了实验后两种方法均获得了成功转染的细胞。但B和D图的明亮视野表明脂质体转染方法的细胞毒性远高于X-tremeGENE HP，导致存活细胞量减少(图片来源于网络). 转染试剂实现了更高的有效***细胞/未转染细胞比率，超过其他RNAi试剂。上海国产转染试剂

采用Lipofectamine RNAiMAX转染试剂转染A549细胞时，实现了比较好的基因***效果和比较低的细胞毒性。上海pei转染试剂原理

产生慢***的比较

通过 LipoD293™ 试剂（升级版）和 Lipofectamine LTX（LTX）试剂将三个 cDNAs 共转染进 293T 细胞。一个 GFP 载体，pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用来测定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 细胞，其次是分别添加不同量的慢定都上清液，1 微升（上图）和 10 微升（下图）。

5 天后，细胞通过流式细胞仪检测。右上角的数字表明转导的细胞的百分比来测定慢***的滴度。由 LipoD293™ and LTX 产生的慢***的滴度被量化，分为是 8x10^6 和 3x10^6 tu/ml 。 上海pei转染试剂原理