DNA转染试剂盒

时间:2022年11月29日 来源:

将胶质瘤干细胞(3105)接种至6孔板中,然后使用riboFECTCP转染试剂分别将5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA转染进胶质瘤干细胞(DP3321、DP7857)中,48h后,qRT-PCR和westernblots检测siRNA***效率。结果发现DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表达水平分别为46.32%、49.71%和43.64%,DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表达水平分别为53.21%、47.46%和46.31%。将1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCPRegent在30μlriboFECTTMCPBuffer中混合以产生转染混合物。然后将混合物加入DMEM(siRNA浓度:50nM)中,与原代小胶质细胞培养48h。RT-PCR和westernblot分析检测转染效率。结果发现转染TREM-1siRNA后******了OGD诱导的TREM-1、p-SYK、SYK、CARD9、p-p65和NLRP3的上调。转染是将核酸导入真核细胞中的过程,是细胞生物学、基因表达和基因***实验中的关键步骤。DNA转染试剂盒

原代细胞直接分离自组织并在适当条件下增殖。因此,它们的形态学和生理特征和体内状态更为相似。但相对于连续细胞系,它们通常更难培养和转染。在经过***次传代培养之后,原代培养物变成了一种细胞系。源自于原代培养物的细胞系具有有限的寿命(即它们是有限细胞系),且随着传代的进行,具有比较高的生长能力的细胞逐渐占据支配地位,从而造成了细胞群内的基因型和表型接近一致的情形。相对来说,这一类细胞要比原代细胞使用起来更为方便,尤其是稳定转染的克隆传代。上海病毒转染试剂价格用于siRNA的转染试剂,还有通用型转染试剂Lipofectamine™.

基于脂质体的转染试剂包括中性脂质体和阳离子脂质体两种。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。目前应用比较***的是带正电的阳离子脂质体转染试剂,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。此方法操作简单,重复性好,在体外转染中有很高的效率,但具有一定的细胞毒性,可能会干扰细胞的代谢。且活性受血清影响,需要去除血清。

用LipoD293™体外DNA转染试剂(Ver.II)(上图)和受欢迎的品牌产品Invitrogen公司的293fectin™(下图)转染pEGFP-C1质粒到HEK293细胞中。转染24小时后,细胞的尼康Eclipse荧光显微镜DIC成像图(左侧)和荧光成像图(右侧)。对悬浮HEK293F产生蛋白质效率的比较30毫升的293F细胞分别使用LipoD293™试剂、293fectin、Xfect和Fugene6等转染试剂按照生产商的标准转染步骤将pEGFP-6xHis质粒导入细胞表达,用量为LipoD293™试剂,20微克,所有其他三种转染试剂均使用30微克质粒DNA。将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中,前后移动培养皿,混合均匀;

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LipoFectMax™转染试剂LipoFectMax™转染试剂具有以下几个优点:高转染效率,适用于多种细胞系对细胞毒性低适用于DNA和RNA的转染转染前无需去除细胞培养基或血清转染后无需清洗细胞或更换培养基转染效率高,适用于多种细胞系图1.LipoFectMax™转染试剂以绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒转染几种常见细胞系,通过检测GFP信号比较转染效率。细胞毒性低图2.LipoFectMax™,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分别对A549细胞进行转染操作,通过计算转染后的细胞存活率比较细胞毒性。DNA转染试剂盒

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