mihc多色荧光免疫组化原理

基于luminex平台的xMAP技术：Luminex：应用荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体，不同的微球在一定程度上可以自由组合，这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。原理：应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此，利用微球技术，可以同时检测高达500个蛋白或基因。特点：1、既能检测蛋白，又能检测核酸2、既能用于临床，又能用于多学科科研领域3、真正意义的“高通量”检测，一次检测100个指标4、在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平生物标志物检测--加速推动免疫学研究进展！mihc多色荧光免疫组化原理

多重荧光免疫组化，主要的技术原理来自TSA技术，TSA即酪酰胺信号放大技术(Tyramidesignalamplification)，是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该技术可与高性能染料AlexaFluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。简单来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，然后去检测结果。mihc多色荧光免疫组化原理微球免疫分析系统CBA是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法。

Q：ELISA实验预实验的目的？A:确认一下样本的稀释比例，虽然试剂盒给出了一些建议，但是不同客户的样本处理方式不同，可能会出现高出标准曲线的情况，那就要预实验测试看下B、降低客户的预期，如果预实验反馈出，客户的结果在检测下限附近，可以让客户更换样本，节省试剂盒Q：ELISA实验预实验是如何安排的？A：会做整条标准曲线，比较好由客户自己挑选的有代表性的预实验样本，至少2个（高值与低值各一，各4个稀释梯度），**少耗费16个孔；若客户吝惜试剂，可只做标准曲线的两个点（比较高点和背景点，确认预实验样本的浓度是否在背景点以上或者是附近），预实验样本做几个稀释度测试（至少2个样本各3个稀释度），**少耗费8个孔；为避免样本反复冻融或正式实验样本不够，预实验样本需要另外准备；

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炎症相关的生物标志物包括:（1）肠道微生物因子：肠道菌群可能受到饮食，益生菌，益生元，外源酶，粪便菌群移植和其他环境因素的影响（2）免疫相关：肠道菌群驱动炎症的扩大，细胞浸润固有层，包括T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞(DCs)和中性粒细胞;活化的固有层细胞产生高水平局部组织促炎细胞因子，包括TNF，IL-1β，IFN-γ和IL-23/Th17细胞途径。（3）炎症介质：如自由基、白三烯,趋化因子和促炎细胞因子（如IL-12,IL-23,IL-17,IL-18和TGF-β）等。LabEx 多因子检测平台：抗体芯片，液相芯片，电化学技术为主的多种检测技术。mihc多色荧光免疫组化原理

多因子实验的正式实验，可以分批次检测。mihc多色荧光免疫组化原理

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