elispot流式检测

酶联免疫斑点技术（Elispot）特点：酶联免疫斑点技术Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术(ELISA)，能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。实验设计在96孔培养板上进行，直接以培养板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纤维素膜为基质，包被上特异性的单克隆抗体，用以捕获细胞分泌的细胞因子。(由于涉及到细胞培养的过程，对单克隆抗体的要求要远高于ELISA中的捕获抗体，该抗体需要无毒，亲和力高等特点。)之后，在培养板的孔内加入细胞培养基(现在无血清ELISPOT技术已经成熟，培养基中可以不再含有血清)、待检测的细胞以及抗原刺激物进行培养。抗体芯片是将大量不同的抗原特异性结合的抗体有序地排列、固定于固相载体表面，形成微阵列。elispot流式检测

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些？如何解决？1)、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是尤其重要的一条。2)、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。3)、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；4)、非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；5)、DAB孵育时间过长或浓度过高；6)、PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要；7)、标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。human elisa kit检测服务高通量蛋白组学（Olink）采用独有的 PEA，邻位延伸分析技术检测蛋白标志物。

肿块物（瘤类）发病机制中的细胞因子（内源性及相关功能）：Il-1（白介素1）：肿块物侵袭和血管生成所必需的IL-6（白介素6）：化学诱导的淋巴瘤所需IL-12（白介素12）：抑制化学致肿块物作用IL-15（白介素15）：促进自然杀伤T细胞白血病IFN-γ：抑制化学致肿块物作用；抑制淋巴瘤；Stat1和Rag2抑制肿块物M-CSF：促进乳腺肿块物侵袭GM-CSF：抑制淋巴瘤和肿块物TNF-α：化学诱发的皮肤肿块物所需MIF：抑制p53肿块物抑制功能TGF-β：抑制结肠肿块物Fas-Fasligand：抑制淋巴瘤发生

酶联免疫斑点技术（Elispot）技术优势(1)单细胞水平，活细胞功能检测：弥补了体液中CK半衰期短的不足，当体液中某CK含量较低时,用ELISPOT法检测具有较高灵敏性。(2)操作简便经济，可以进行高通量筛选：既可检测自发分泌细胞，又可检测抗原特异性CK分泌细胞，具有较高特异性，并可观察药物治疗反应，且使对CSF中T、B细胞研究成为可能，对神经免疫疾病发病机制研究及临床疗效观察均有重要价值。(3)灵敏度高：在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。灵敏度比传统ELISA方法高2-3个数量级。LabEx现在配备先进的实验室仪器：Luminex检测平台，流式检测平台，MSD检测平台等。

MSD经典10因子推荐：中检院《CAR-T细胞医治产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》中提到，使用MSD技术检测CAR-T细胞医治后样本中细胞因子表达来评估药物的安全性和有效性。MSD技术－电化学发光和点阵技术MESOSCALEDISCOVERY公司的ECL(基于石墨微孔板的电化学发光免疫分析）技术是基于ELISA基本原理的升级，在板底通电从而激发标记物SULFO-TAG发光并由CCDCamera进行信号采集；MSDECL技术提高免疫分析的灵敏度，延伸了线性范围。MSD通过点阵技术，在96孔石墨电极板里可实现10个指标每孔的检测，同时实现多个指标定量。MSD技术独具一格的“六合一”特点：亚fg/ml灵敏度，低背景，多靶点检测，6个数量级线性范围，适用于不同样本基质（血清／血浆，细胞培养上清，脑脊液，尿液，组织匀浆，细胞裂解液）（人／猴子／小鼠／大鼠）,5-25ul微量样本检测。LabEx提供V-PLEX人、小鼠、大鼠：炎症反应、免疫调节、TH1/TH2通路重要指标多因子组合检测限。试剂我们提供；检测我们来做，助您的时间更有价值！多因子技术可同时检测多个样本的多个指标，如通路中多个相关蛋白的共检测。心脏生物标志物

LabEx提供蛋白水平检测服务！elispot流式检测

上海乐备实生物技术有限公司（简称：乐备实）是优宁维的全资子公司，是国内主要专注于提供单/多因子相关检测分析的实验服务专家，目前已经扩展到多色流式检测服务和多色组化检测服务。LabEx成立于2018年，前身为成立于2015年的优宁维实验室服务事业部，总部位于上海。自成立以来，LabEx不断寻求突破，目前已发展成为具有成熟的样本制备、储存、管理、运输以及检测、数据分析等服务，我们有严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目优化系统，努力打造在基因、细胞、蛋白、组织等水平的专业实验室技术平台。我们现有PCRArray、ELISA，MSD、Luminex、CBA，抗体芯片、流式、免疫组化等12个技术平台。通过线下和线上的方式为超过1000个客户提供服务，年检测样本超过20万，受到了广大客户的赞赏。LabEx继承优宁维的向正、向善、向上的价值观，我们的愿景是“服务加速研究-SpeedUpResearch”，努力为广大客户提供专业、安全的实验室服务，成为你科研的得力助手！elispot流式检测

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