抗体芯片实验

时间:2022年06月27日 来源:

酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。基本原理:它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于订量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便迅速,特异性强。LabEx提供高通量蛋白组学(Olink)服务!抗体芯片实验

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免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些?1)、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液,怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果?另外,不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索比较好浓度。2)、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验,这是比较好的时间和次数。若不行,还可高压修复。3)、组织切片本身这种抗原含量低;4)、血清封闭时间过长。5)、DAB孵育时间过短。6)、细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。7)、开始做免疫组化,我建议你一定要首先做个阳性对照片,排除抗体等外的方法问题。LabEx抗体芯片主要用于蛋白表达谱、蛋白质磷酸化及蛋白质相互作用等检测。磁珠分选抗体

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