流式检测T细胞内细胞因子

基于luminex平台的xMAP技术：Luminex：应用荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体，不同的微球在一定程度上可以自由组合，这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。原理：应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此，利用微球技术，可以同时检测高达500个蛋白或基因。特点：1、既能检测蛋白，又能检测核酸2、既能用于临床，又能用于多学科科研领域3、真正意义的“高通量”检测，一次检测100个指标4、在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平LabEx提供高通量蛋白组学（Olink）服务！流式检测T细胞内细胞因子

单细胞功能组学（IsoPlexis）技术优势>在看似同质的细胞亚群内研究异质性>利用功能蛋白质数据层和免疫细胞比较免疫应答情况>通过多功能强度指数（PSI）建立参考点>优化试验以预测区分应答者和非应答者>表征导致身体状况/应答的生物学和功能驱动因素技术原理采用微流控技术，通过12,000个亚纳升级别的微室同时捕获上千个单细胞。搭配IsoCode芯片抗体条形码技术，捕获每个小室中单个活细胞分泌的多重蛋白质，或者对单细胞裂解后释放出的多种磷酸化蛋白进行捕获，然后通过基于ELISA原理的全自动化蛋白检测技术，捕获多重蛋白的荧光信号，一次可采集多达30种以上的功能蛋白质。在检测中从每个单细胞获得的蛋白质组信号将无缝传输到IsoSpeak生信分析软件，进行全自动分析和可视化呈现，并可直接用于文章发表。流式荧光液态芯片技术好吗多因子技术样本需求量少，检测指标多，可兼容血清，裂解液，脑脊液等多种生物学体液。

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些？如何解决？1)、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是尤其重要的一条。2)、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。3)、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；4)、非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；5)、DAB孵育时间过长或浓度过高；6)、PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要；7)、标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。

问：因子检测技术有哪些？答:Array抗体芯片、CBA、luminex、MSD。问：多因子实验适用的样本类型有哪些？答:Serum（血清）、Plasma（血浆）、Cell/Tissuelysate（细胞/组织裂解液）、CerebrospinalFluid（脑脊液）、支气管肺泡灌洗液、鼻腔灌洗液、腹腔液等等。问：如何计算96孔板可做多少样本？答:标曲16孔，预实验8孔，剩余72孔，单孔可做72样本，复孔可做36样本；问：多因子实验的正式实验，是否可以分批次检测？答:可以，但是有如下要注意：（1）CBA：试剂盒须在一个月内用完，否则标准曲线要重做，重做就要用到试剂，那样本就样减少。（2）Luminex：每次都必须要做标准曲线，会浪费试剂和孔板，同时试剂也要在一个月内用完，防止试剂过期。（3）MSD：每次都必须要做标准曲线，会浪费试剂和孔板，同时试剂在一个月内用完，防止试剂过期，每次送样+标准曲线的数量，建议是4的倍数，否则会造成浪费。LabEx提供28种抗体芯片，用于人，小鼠和大鼠物种的蛋白检测。

MSD经典10因子推荐：中检院《CAR-T细胞医治产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》中提到，使用MSD技术检测CAR-T细胞医治后样本中细胞因子表达来评估药物的安全性和有效性。MSD技术－电化学发光和点阵技术MESOSCALEDISCOVERY公司的ECL(基于石墨微孔板的电化学发光免疫分析）技术是基于ELISA基本原理的升级，在板底通电从而激发标记物SULFO-TAG发光并由CCDCamera进行信号采集；MSDECL技术提高免疫分析的灵敏度，延伸了线性范围。MSD通过点阵技术，在96孔石墨电极板里可实现10个指标每孔的检测，同时实现多个指标定量。MSD技术独具一格的“六合一”特点：亚fg/ml灵敏度，低背景，多靶点检测，6个数量级线性范围，适用于不同样本基质（血清／血浆，细胞培养上清，脑脊液，尿液，组织匀浆，细胞裂解液）（人／猴子／小鼠／大鼠）,5-25ul微量样本检测。LabEx提供V-PLEX人、小鼠、大鼠：炎症反应、免疫调节、TH1/TH2通路重要指标多因子组合检测限。试剂我们提供；检测我们来做，助您的时间更有价值！LabEx提供MSD超敏电化学发光平台服务！生物芯片检测技术 抗体检测

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