流式细胞因子检测实验步骤

时间:2022年09月16日 来源:

LabEx多因子检测技术应用★检测样本:血清、血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞培养液上清、细胞裂解物等等各种液相样本中可溶性细胞因子、炎症因子、趋化因子、酶等的浓度检测★肿块物研究及肿块物疾病的辅助诊断、疗效和预后监测★干细胞研究和干细胞医治监测★免疫学研究和免疫疾病的辅助诊断和监控★疾病的研究及辅助诊断和疗效评价★免疫功能监测★药效评价,药物研发、疫苗研究★细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白定量分析LabEx服务为您提供完整的实验结果报告,包括数据分析结果,原始数据文件,实验protocol等。LabEx 流式平台:BD C6,BD celesta,BD calibur,12色流式检测分析。流式细胞因子检测实验步骤

基于MSD平台的电化学发光超敏多因子检测技术MSD(MesoScaleDiscovery)原理:MSD电化学发光技术主要基于超敏多因子电化学发光分析仪MESOSector600或QuickplexSQ120。通过点阵技术,在96孔石墨电极板里可实现10个指标每孔的检测。也可在24孔板里定制实现100指标/孔的筛选检测。特点:1、更高灵敏度与更宽的线性范围:灵敏度可达0.05pg/ml,有效线性范围达6log。2、节省样本用量,可实现多重检测:上样量≤25ul,为珍稀样本的研究提供了更多的数据。3、均一性、重复性高:板内CV<6-8%,板间<10%,批间<15%。同时MSD试剂盒有效期长达30个月,为长时间研究项目,提供了使用同一批号试剂的可能性。4、样本兼容度高,基质效应小5、实验流程简便、快速、多元化6、信号稳定且不受显色顺序影响7、开放性平台,高载量的石墨电极,多样化实验方案,更节省的包被用量。CD20检测服务抗体芯片是将大量不同的抗原特异性结合的抗体有序地排列、固定于固相载体表面,形成微阵列。

细胞因子在肿块物医治中的作用Il-2:增强NK细胞和CD8T细胞功能;增加血管通透性IL-3:增强肿块物抗原呈递IL-4:增强嗜酸性粒细胞功能和T细胞活化IL-6:增强T细胞和B细胞功能;抑制IL-6可减少淋巴增生IL-7:增强T细胞功能IL-10:抑制肿块物抗原呈递IL-12:增强Th1免疫和细胞毒性;抑制血管生成IL-13:抑制对病毒性肿块物的细胞毒性IL-15:增强细胞毒性IL-18:增强Th1免疫和细胞毒性;抑制血管生成M-CSF:增强巨噬细胞功能GM-CSF:增强肿块物抗原呈递IFN-α:增强肿块物抗原呈递和细胞毒性IFN-γ:增强肿块物抗原呈递和细胞毒性TNF-α:诱导肿块物细胞凋亡TRAIL:诱导肿块物细胞凋亡FLT3ligand:刺激树突状细胞和NK细胞功能Lymphotactin:增强T细胞募集TGF-β:抑制T细胞效应器功能

基于luminex平台的xMAP技术:Luminex:应用荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体,不同的微球在一定程度上可以自由组合,这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。原理:应用微球和流式细胞仪的原理,微球内部含有三种免疫荧光,通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此,利用微球技术,可以同时检测高达500个蛋白或基因。特点:1、既能检测蛋白,又能检测核酸2、既能用于临床,又能用于多学科科研领域3、真正意义的“高通量”检测,一次检测100个指标4、在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平为啥高分的文章用的都在做细胞因子的检测?

Q:样本处理方案?A:血清:不含抗凝剂的**管**,室温静置2小时(避免震动,防止溶血),离心20min(4℃,2000g),取上清,建议再一次离心和取上清,建议分装后-80℃冻存,避免反复冻存血浆:含抗凝剂(EDTA、肝素,具体采取哪种抗凝剂,参考说明书)的**管**,,离心20min(4℃,2000g),取上清,建议再一次离心和取上清,建议分装后-80℃冻存,避免反复冻存细胞裂解液:收集细胞,PBS清洗后,离心10min(1000g,4℃),弃去上清,加入适量裂解液(107细胞对应200-300ul裂解液),放置于4℃冰箱(20min),离心10min(3000g,4℃),取上清,建议再一次离心和取上清,测定BCA总蛋白浓度,-80℃保存组织裂解液:适量RIPA裂解液加入组织中(10mg对应100-200ul裂解液),组织破碎器处理组织至匀浆(冰上处理),放置于4℃冰箱(20min),离心10min(3000g,4℃),取上清,建议再一次离心和取上清,测定BCA总蛋白浓度,-80℃保存细胞上清:离心,取上清,建议分装后-80℃冻存,避免反复冻存微球免疫分析系统CBA是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法。IL-2 elisa kit检测服务

MSD平台由于其独特的电化学发光原理,可将许多非特异信号予以排除,对于各类生物学样本的兼容度高。流式细胞因子检测实验步骤

抗体蛋白质芯片技术(Sengenics)优势1、包被蛋白具有正确折叠的空间结构/芯片表面水凝胶保护2、特异性蛋白质阵列上正确折叠的蛋白质可确保构象表位,可用于自身抗体结合(90%的抗体表位是非线性的)。与显示低信噪比的其他阵列相比,这会带来特定的命中和低背景噪音。3、检测限<10pg/ml蛋白质阵列可用于以极高的灵敏度检测自身抗体,只需要1-10μL血清。检测限在10pg/ml范围内,线性动态范围至少为5个数量级。4、高重复性Sengenics蛋白质阵列使用多个阳性和阴性对照来测量研究和批次内和之间的重复性。下图显示在比较两个不同批次中的6524个蛋白质数据点的自身抗体水平时,0.97以上的近乎完美的Pearson相关性。5、一致性高SengenicsKREXTM蛋白质折叠技术用于创建具有一致性的蛋白质阵列。下图显示了Immunome蛋白质阵列的蛋白质内复制变异系数(CV%)百分比。Immunome的平均CV%为7.2%。流式细胞因子检测实验步骤

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