信号通路的研究方法

时间:2022年11月14日 来源:

抗体芯片技术服务包括:1,样品蛋白质抽提:a.实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂,匀浆后抽提总蛋白。b.实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml-1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂抽提总蛋白。c.实验对象为血清,则直接进入步骤3。2,蛋白质定量:按蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。3.细胞因子抗体芯片封闭和抗体孵育a.细胞因子抗体芯片封闭后加入50-500ug蛋白质(若标本为血清,通常取100ul血清)与抗体芯片4℃孵育过夜。b.加入标记好的抗体室温孵育1小时。4,抗体芯片检测5.提供实验报告:包括详细的实验方法和芯片实验结果的各种图表和数据比较。您只需提供保存完好的标本(血清、组织或细胞、细胞上清或其他非常规液质生物样本),本公司专业的技术服务人员就可替您完成实验操作与数据分析。生物标志物检测--加速推动免疫学研究进展!信号通路的研究方法

Luminex液相芯片检测实验技术服务原理:Luminex:应用微球和流式细胞仪的原理,微球内部含有三种免疫荧光,通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此,利用微球技术,可以同时检测高达500个蛋白或基因。Luminex技术的测量结果在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平。Luminex应用的荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体,不同的微球在一定程度上可以自由组合,这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。多目标分子的同时测定可以减少生物样品的消耗量,节省成本和测定时间,并且使多种目标分子之间相关性的分析更加准确。目前,Luminex试剂盒已经可以检测500多种蛋白质分子,包括细胞因子、自身抗体、肿块物标志物等。磁珠分选细胞 厂家本panel可检测以下因子:GLP-1 (active),Glucagon,Insulin 种属:Human。

酶联免疫斑点技术(Elispot)技术优势(1)单细胞水平,活细胞功能检测:弥补了体液中CK半衰期短的不足,当体液中某CK含量较低时,用ELISPOT法检测具有较高灵敏性。(2)操作简便经济,可以进行高通量筛选:既可检测自发分泌细胞,又可检测抗原特异性CK分泌细胞,具有较高特异性,并可观察药物治疗反应,且使对CSF中T、B细胞研究成为可能,对神经免疫疾病发病机制研究及临床疗效观察均有重要价值。(3)灵敏度高:在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。灵敏度比传统ELISA方法高2-3个数量级。

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?如何解决?1)、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是尤其重要的一条。2)、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。3)、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;4)、非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;5)、DAB孵育时间过长或浓度过高;6)、PBS冲洗不充分,残留抗体结果增强着色,在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要;7)、标本染色过程中经常出现干片,这容易增强非特异性着色。本panel可检测因子:Clusterin,Cystatin C,KIM-1,IL-8,Lipocalin-2/NGAL,MCP-1,Osteopontin 种属:Canine。

流式多因子检测技术(CBA)微球免疫分析系统CBA(CytometricBeadArray)是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。CBA是种结合流式细胞仪荧光检测和微球免疫分析的应用技术,可以轻松的在短时间内,同时检测多种蛋白,其作用原理利用荧光强度不同的微球,上面带有可以辨认特定蛋白的抗体(captureantibody),与样本(例如血清、血浆、培养上清液、细胞裂解液等)及PE检测抗体(detectionantibody)作用后,以流式细胞仪进行分析,根据PE荧光强度的不同用FCAPArray软件进行分析和标准品做比对后,可进行样本内特定,蛋白的定性或定量。CBA具有以下优点:每次检测需25-50ul样本;灵敏度可达0.274pg/ml时间t夬速,需3-4小时,快速上样可同时测定30种蛋白,实验可重复性高利用FCAPArray软件,不论样本数目多少,可快速分析完成分析本panel可检测以下因子:MMP-3,MMP-12,MMP-13 种属:Human。流式细胞分选

本panel可检测以下因子:Cortisol,HSA,Involucrin,Keratin-6,Keratin-1/10 种属:Human。信号通路的研究方法

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