PCR仪保修

时间:2022年06月12日 来源:

梯度PCR同时到温在实验室中,用梯度PCR仪进行PCR反应条件的优化筛选时,往往有时间和温度两个变量。当设定了温度梯度时,我们只关注了温度对PCR反应的影响。实际上,对于一般的PCR仪,当变温范围发生变化时,其温度到达的时间也会有所变化。那么这就提出了一个问题:优化的结果究竟是温度的作用还是时间的作用?ETC811PCR仪运用特殊的控温算法很好的解决了这个问题。消除了时间变量,你的梯度PCR实验只需要关注反应温度即可,很大提高了实验结果的确定性。实时荧光定量 PCR技术原理与应用聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。PCR仪保修

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PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时聚合酶链式反应间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。

理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:①引物长度:15-30bp,常用为20bp左右。②引物扩增跨度:以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。⑤引物3’端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列好有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪称作传统PCR仪,也叫普通PCR仪。PCR仪保修

对于一般的PCR仪,当变温范围发生变化时,其温度到达的时间也会有所变化。PCR仪保修

聚合酶链式反应简称PCR(PolymeraseChainReaction),它是体外酶促会成特异DN段的一种方法.由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增.具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。PCR仪就是完成基因迅速扩增的仪器平台,它利用半导体制冷技术,实现了试剂温度的快速、准确和自动循环,从而实现了PCR扩增过程的全自动化。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸测序等基础研究,还可用于疾病的临床诊断。PCR仪保修

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