北京正规EdU细胞增殖检测试剂盒价格
细胞增殖虽然与多种因素有关,比如细胞代谢活性、与细胞增殖相关的蛋白表达、ATP的浓度等等,但是检测细胞增殖现象的直接准确的方法就是用荧光探针直接检测遗传物质DNA的合成,这种方法是研究细胞增殖、信号通路、DNA修复及分化等等方向常用的方法。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比,EdU只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内更容易扩散,不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织、的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度上海东寰EdU细胞增殖检测试剂盒的运用领域。北京正规EdU细胞增殖检测试剂盒价格
传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性,抗原修复,抗原抗体过夜孵育,操作步骤复杂繁琐。并且由于BrdU抗体分子较大,嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU抗体结合,必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露,但变性的程度可能导致错误结果。如果变性不充分,会导致BrdU难以暴露,无法检测,而且变性过程从边缘向中间渗透,会导致细胞核DNA的变性不均匀,边缘模糊不清。如果变性过分,则会导致DNA断裂,甚至降解,导致核染不均一。另外,不同抗体试剂公司的抗体质量不一致,造成难以确保实验重复性,且容易产生假阳性结果。江西品质好的EdU细胞增殖检测试剂盒哪家好EdU细胞增殖检测试剂盒给社会带来了什么好处?
EdU细胞增殖检测方法不需要剧烈的DNA变性操作,只需温和的细胞固定化和透化处理,能够较好地保护细胞形态、DNA整体结构及细胞内抗原识别位点,更适合结合其他染料或蛋白标记(如P65抗体)等进行多重标记,从而在细胞水平获取更多的直观多维特征信息,更适合深入开展细胞功能方面的研究。该方法无需DNA变性,无需抗原修复,无需抗原抗体反应,简单、灵敏、快速、准确,适合各种细胞系的细胞增殖检测,尤其适用于各种细胞系的高通量筛选实验,如在药物筛选中检测加药后细胞增殖变化。
EdU标记(a)将细胞完全培养基中按照500:1的比例加入EdU溶液,制成2xEdU标记培养基;(b)提前将2xEdU标记培养基预热,然后等体积加入到细胞原有培养基中,获得lxEdU溶液,其中EdU的终浓度为10uM;注:1)我们不建议替换全部培养基,因为这样可能会影响细胞增殖的速度;2)配置好的培养基建议现用现配,用量以没过细胞为宜;(c)每孔加入300ul含EdU培养基孵育细胞2小时,弃培养基;注:1)培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态;2)大多数**细胞以及粘附细胞系均可采用2小时的孵育时间(d)以lxPBS清洗细胞两次,毎次5分钟,以除去未掺入DNA的EdU残留。注:贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。EdU细胞增殖检测试剂盒去哪买?
本试剂盒可以检测到细胞或组织样品中单个的增殖细胞,同时也可以对细胞或组织样品总体的细胞增殖情况进行定量检测。本试剂盒可以检测培养的细胞或组织样品,也可以检测组织切片,但均需提前进行EdU的掺入。细胞增殖能力的检测是评估细胞活性、基因毒性和抗药物效果等的基本方法。公认的精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成。初使用的通过检测DNA合成来检测细胞增殖的方法是放射性标记核苷掺入法,如氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷([3H]thymidine)掺入法。EdU细胞增殖检测试剂盒使用时的注意事项。山东正规EdU细胞增殖检测试剂盒
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细胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛细胞固定液,室温培养30分钟,弃固定液;(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸,摇床孵育5分钟,以中和过量的多聚甲醛;(c)弃甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室温清洗5分钟;(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100细胞通透液,室温通透10分钟,弃细胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室温清洗5分钟;该产品是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育EdU后进行细胞涂片处理,固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。也可以应用于流式细胞仪检测北京正规EdU细胞增殖检测试剂盒价格
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