血浆外泌体蛋白质组学

外泌体(exosome)是多种活细胞经过“内吞–融合–外排”等一系列过程主动向胞外分泌的直径为30~150 nm的双层膜结构细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs), 广fan存在于血液、尿液和唾液等生物体液中, 并通常作为细胞间胞质蛋白、核酸和脂质的转移载体发挥运输调控作用, 被认为是细胞间通讯的核xin部分。外泌体于1983年在HARDING等和PAN等研究羊网织红细胞分化的过程中被发现, 并于1996年由RAPOSO等证实能够作为一种细胞间通讯结构在免疫系统中发挥作用后得到了广fan关注。近年来, 随着外泌体在中流、心血管和感ran性疾病等多种疾病形成中的生物学作用和功能被逐渐揭示, 尤其是2015年MELO等发现, 外泌体Glypican-1蛋白可有效区分慢性胰腺炎与胰腺ai以来, 外泌体作为疾病诊断、预后预测标志物以及药物靶向zhiliao载体的转化医学应用也得到了迅速的推进。尿液外泌体甲状腺球蛋白是预测甲状腺ai复发的潜在标志物。血浆外泌体蛋白质组学

外泌体携带的与疾病进展紧密关联的分子标志物可用于疾病进展的监视、检测和诊断, 是一种潜在的非侵入性生物标志物。由于外泌体本身可以作为抗原提呈小泡, 且有较长的循环半衰期, 可用于免疫学相关研究, 同时, 源自ai细胞的外泌体可以被工程化, 发挥免疫刺激作用, 可作为中流疫苗应用于ai症的免疫zhiliao。此外, 外泌体稳定而广fan地分布在qi官和组织中, 具有低免疫原性、高耐受性等特点, 且良好的膜渗透性可使其通过血脑屏障, 因此可用作组织和qi官特异药物输送系统, 兼有高输送效率和低副作用。因此, 外泌体适合用作药物载体递送zhiliao剂(如阿霉素或姜黄素), zhiliao性miRNA、siRNA等核酸和蛋白质, 运送至靶位点后实现靶向zhiliao。安徽组织外泌体染色超速离心是从生物体液或细胞上清分离外泌体的金标准方法。

在运输DOX的研究中，Wei等选择了已经在临床上使用的未成熟的树突细胞作为母代细胞，通过化学转染使其分泌的外泌体表面含有Lamp2b，这种蛋白可以与αv整合蛋白特异性iRGD肽结合，使外泌体对DOX的运输具有靶向性。将对iRGD肽靶向的外泌体和未经靶向性处理的外泌体用DiR染料标记，并分别静脉注射入移植了人乳腺ai细胞的小鼠体内，观察到靶向的外泌体在注射30min后已经出现在中流组织处，在注射2h后外泌体的含量高，而未经靶向性处理的外泌体在注射后主要集中在肝脏，几乎很少到达中流组织处，说明对iRGD肽靶向的外泌体具有很好的靶向性。

小鼠骨髓树突状细胞产生的外泌体中含有的中流多肽能够启动特异性细胞毒性T淋巴细胞，根除或抑制小鼠中流的生长，这一发现为中流免疫zhiliao提供了新的研究思路。另外，树突状细胞来源的外泌体也能够通过激huo其他免疫细胞诱导抗中流反应，从而抑制中流。B细胞分泌的外泌体包含MHCⅡ-多肽复合物，能够激huo人和小鼠抗原特异性T细胞，从而实现调节免疫响应的功能。细菌或病原体感ran的巨噬细胞外泌体能够刺激巨噬细胞和中性粒细胞分泌炎性介质，在增强机体免疫监督方面发挥重要作用。外泌体及活性蛋白能直接穿透皮肤间隙，快速直达基底层起效。

外泌体运输的基因类药物也可以是miRNA，miRNA是一类非编码的内源性RNA，主要用于调节转录后的基因表达。miRNA主要通过与mRNA的未翻译的区域(UTRs)结合起到抑制基因表达和降解mRNA的作用。与siRNA不同，miRNA抑制mRNA的表达不需要完美的碱基配对，因此每种miRNA可以抑制多种蛋白质的表达，而每种siRNA只针对一种蛋白质。miRNA的运载也存在着种种挑战:miRNA体内稳定性差、生物分布不理想、易被体内酶降解以及容易引起副反应等。越来越多的研究表明外泌体也是体内运载miRNA的优良载体，并且利用外泌体运输miRNA的zhiliao方法已经在许多疾病模型中得以应用。干细胞外泌体有减少细胞凋亡、促进血管生成、抑制纤维化等重要生物学功能，在调控组织再生方面有好的前景。吉林体液外泌体粒径检测

双层囊膜结构（茶托状）是外泌体重要标志之一，但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。血浆外泌体蛋白质组学

基于免疫细胞来源的外泌体能够介导和调节机体对中流的免疫反应，外泌体在中流免疫zhiliao方面的潜力受到广fan关注。其中树枝状细胞产生的外泌体包含大量的MHC-多肽复合物和免疫刺激相关的分子，能够激huo相关的T细胞，介导体内抗中流应答，在多个临床试验中表现出良好的抗中流疗效。Morse等考察了树枝状细胞外泌体对非小细胞肺ai患者的疗效。结果表明，患者对树枝状细胞外泌体耐受性良好，1/3患者表现出了对树枝状细胞外泌体的T细胞响应，2/4患者自然杀伤细胞活性得以激huo。血浆外泌体蛋白质组学

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