四川重点项目指南 外泌体载药

为考察装载药物的外泌体DATS-Exo在体内抑制中流转移的情况,将肺转移小鼠黑色素瘤中流细胞通过尾静脉注射入C57BL/6小鼠体内,建立实验性肺转移小鼠模型并通过腹腔注射给予DATS-Exo及DATS。结果显示,造模后,H&E染色发现模型组小鼠与正常组相比,肺部发生了严重的转移,体现在模型组小鼠肺部出现了较多的中流结节数目和较大的中流体积。不论是DATS组还是含药外泌体DATS-Exo组均表现出一定的抑制中流转移的效果,而与DATS组相比,装载了DATS药物的外泌体载药系统能更好地抑制中流的肺转移,减少中流结节数目,降低异常的肺重量,具有更优的抗中流转移作用。外泌体装载小分子药物的方法有很多,主要有被动孵育、超声、电穿孔及供体细胞载药等。四川重点项目指南 外泌体载药

间充质干细胞（MSC）的外泌体成为有潜力的天然药物递送载体的优势：与其他来源外泌体的产生机制一致，即首先由细胞质膜内陷形成内体，然后内体向内出芽形成多泡体，而多泡体具有两种命运，一种是移动到细胞表面与质膜融合，以胞吐的方式将外泌体释放到细胞外;另一种是与溶酶体结合，将内容物降解。MSC-Exo具有外泌体的共同特征，即富含四跨膜蛋白CD9、CD63、CD81，整合素，主要组织相容性复合物Ⅰ、Ⅱ，热休克蛋白，多泡体合成相关蛋白(ALIX、TSG101)，核酸，胆固醇、磷酸甘油酯、鞘磷脂等。此外，MSC-Exo还具有特异性标志物，例如，CD29、CD90、CD73和CD44等。MSC-Exo具有与MSCs相似的生物学功能，而且避免了细胞移植的风险，易于获取、储存和管理;可控性高、免疫原性低、安全性好。河北外泌体载药技术原理外泌体内源性载yao方式即先将药物载入供体细胞中，当药物分选进入外泌体并释放外泌体后分离纯化而获。

有实验将an-timiR-9载入到间充质干细胞中，使其分泌的外泌体包载有an-timiR-9。通过体外细胞传递实验发现，间充质干细胞可以通过外泌体递送an-timiR-9到耐药性多形性胶质细胞瘤（GBM）中，致使耐药性细胞株中的MDRI基因下调，P－糖蛋白表达量减少，从而增加耐药性细胞株对替莫唑胺的化学敏感性，有效地抑制耐药性多形性胶质细胞瘤的增殖。研究人员采用外泌体对GBM进行zhiliao不只停留在细胞实验上，相关的体内研究也已有报道。研究者将高表达miR-146b间充质干细胞源性的外泌体用于zhiliaoGBM的移植瘤模型中，结果表明载有miR-146b的外泌体能有效地抑制中流的生长。

通过体外实验结果得出，负载miＲ-132的间充质干细胞外泌体能够明显增加内皮细胞的管腔样结构;在体内实验中，外泌体预处理的人脐静脉内皮细胞具有更强的血管生成能力。此外，在小鼠缺血心脏中植入的包载miＲ-132的外泌体明显增强了梗塞周围区域新血管生成并保护了心脏功能。心肌梗死后，移植MSCs的zhiliao作用也可能是由负载miＲ-125b-5p的外泌体改善自噬流实现的。有研究利用重组腺病毒介导miＲ-486基因修饰MSCs，结果发现，其能够提高MSC-Exo中miＲ-486的水平，而且发现高表达miＲ-486的MSC-Exo具有促进心肌细胞增殖、迁移以及抑制心肌细胞凋亡的作用，有望成为心脏再生修复的新策略。间充质干细胞外泌体能通过装载miＲ-132zhiliao心肌缺血。

β-榄香烯 (β-ELE) 是从莪术根茎中提取的一种新型的非细胞毒性抗中流药物, 句有疗效确切、低毒等特性, 能通过凋亡途径抑制肝ai细胞、乳腺ai细胞等多种中流细胞的增殖与迁移, 并能逆转中流细胞的多药耐药性, 增加对化疗药物的敏感性, 但其作用机制尚未完全阐明。目前研究认为第10染色体同源丢失性磷酸酶−张力蛋白基因 (PTEN) 能抑制多种ai症的发生, 并能增加耐药细胞对药物的敏感性。Zhang等人研究显示, 利用乳腺ai耐药细胞株与负载β-ELE的外泌体 (50 μmol·L−1/L, 30 h) 共培养, 分析发现负载β-ELE的外泌体上调了耐药细胞中miR-34a及其靶基因PTEN的表达, 并下调耐药miR-452和多药耐药基因蛋白P-gp的表达, 明显逆转了乳腺ai的耐药性。外泌体作为药物载体可稳定存在于血液中,纳米级尺寸增强药物在中流部位的渗透滞留效应(EPR)。吉林动物细胞样本外泌体载药参考价

HEK293FT来源外泌体与脂质体融合为杂交外泌体，可装载并传递靶向RunX2的CRISPR/Cas9系统至间充质干细胞中。四川重点项目指南 外泌体载药

外泌体的提取方法在外泌体载药系统中应用——微流控技术。微流控是利用微纳米级尺寸的管道来处理和操控流体所涉及的一门技术,其在外泌体分离方面的应用受到越来越多学者的关注。Jie等人开发了一种三维纳米结构微流控芯片,微柱阵列通过化学沉积将交叉多壁碳纳米管功能化,然后其就可以识别特定的分子(CD63)并利用独特拓扑纳米材料高效的捕获外泌体。Wunsch等人利用硅工艺生产纳米级确定性侧向位移(Nano-DLD)芯片,得到了均匀的间隙尺寸,该芯片可以灵敏地将20~110nm的颗粒分离。该研究证明了外泌体基于大小的位移,从而揭示了利用芯片分选和量化纳米级生物胶体的潜力。四川重点项目指南 外泌体载药

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