外泌体蛋白质组学

时间:2023年02月03日 来源:

   将RNA加载到细胞外泌体中的另一种方法是生成脂质包被的RNA颗粒,并通过混合诱导的分区将这些颗粒整合到纯化的细胞外泌体中。正如预期的那样,此过程会导致细胞外泌体尺寸略有增加和细胞外泌体数量减少,但它是高效且准确的(>90%)。然而,需要用脂质预包被RNA会带来费用和时间限制以及纯化。因此,虽然此过程可用于研究目的,但要扩展到临床或商业应用可能具有挑战性。细胞外囊泡(EV)被认为是用于各种基因诊疗的有前途的运载工具。它们是相对惰性的、非免疫原性的、可生物降解的和生物相容的。CD4+T细胞产生的外泌体具有免疫调节的作用。外泌体蛋白质组学

    生物学研究和药物应用取决于彻底表征和均质外泌体制剂。醉重要的外泌体衡量标准是数量和规模。然而,外泌体太小而无法通过传统的光学显微镜观察到。这是该领域普遍认可的主要障碍。电子显微镜(EM)dai表了纳米粒子研究领域的标准,也已应用于外泌体。然而,许多EM制备方法采用脱水步骤,可能会改变任何液体囊泡的三维(3-D)形状。动态光散射、纳米粒子跟踪分析(NTA)和醉近的纳米级流式细胞术等技术经常将外泌体分析结果作为单一的统计数据。这些方法在识别外泌体亚群方面可能受到限制,并且无法检测外泌体表面的标记聚类。这些方法中的大多数不如直接随机光学重建显微镜(dSTORM)敏感,并且可能会错过only具有单个表面标记分子的外泌体种群。为了解决这一障碍,研究团队采用了多色3-D超分辨率显微镜来测量溶液中的单个外泌体并定位其表面的蛋白质。 辽宁腹膜透析液外泌体示踪不同肝脏疾病中,细胞分泌的外泌体所携带的核酸和蛋白组分之间存在差异。

    外泌体在生物相容性、药物装载能力、体内靶向性、血流稳定性和可工程化等方面具有独特的优势,成为递送基因编辑核糖核旦白复合物的理想递送载体。现有将Cas9RNP包载至外泌体中的方法主要依赖细胞内源性技术,需要事先在细胞中转染CRISPR-Cas9质粒,转录翻译后在特定时间收集该细胞的外泌体,步骤较多,复杂费时且可控性差。本研究采用优化的电穿孔方法避免了质粒转染的复杂过程,在细胞外直接将Cas9RNP装载至肝成纤维细胞来源的外泌体中,制备获得的外泌体基因编辑纳米颗粒(ExosomeRNP)可成功将RNP递送至靶细胞内产生高效的基因编辑效应。值得注意的是,在动物体内ExosomeRNP可通过肝脏蓄积和同源靶向作用,将RNP精细递送至肝脏组织中,避免非靶organ的基因编辑,提高体内基因组编辑的安全性和精细性。

    胆管ai(CCA)是一种致命性疾病,通常在无法切除的晚期才被发现。目前,还没有有效的诊断方法或生物标志物可以高可信度地早期检测CCA。分析从液体活检中获取的tomour来源的细胞外泌体为实现这一目标提供新的机会。在这里,报告了一种先进的纳米等离子体传感技术,称为FLEX(荧光放大细胞外囊泡传感技术),用于灵敏和稳健的单外泌体分析。在FLEX测定中,外泌体被捕获在等离子体金纳米孔表面上,并针对CA相关生物标志物进行免疫标记以识别t外泌体。底层等离子体金纳米孔结构然后放大外泌体的荧光信号,这是单个外泌体水平的有效放大过程。FLEX外泌体分析揭示了细胞外泌体及其标记水平的普遍异质性。FLEX还检测到由于信号微弱而无法通过传统外泌体荧光成像检测到的小型t外泌体。tomour标志物(MUC1、EGFR和EPCAM)在CCA中被识别,这种标志物组合用于检测临床胆汁样本中的t外泌体。FLEX测定法检测到CCA,曲线下面积为,明显优于目前的临床标志物。灵敏准确的纳米等离子体外泌体传感技术有助于早期CCA诊断。 外泌体主要呈圆形或椭圆形,杯口样,直径在40-200 nm之间。

    外泌体对免疫应答的调节也可能涉及免疫调节分子的呈递,如PD-L1(程序性细胞死亡配体1)和FasL(Fas细胞表面死亡受体配体)。黑色素瘤来源的外泌体上的PD-L1在体内抑制CD8+T细胞抗tumour功能,ai细胞来源的外泌体以PD-L1依赖的方式阻断树突状细胞成熟和迁移。此外,ai细胞来源的PD-L1+外泌体促进荷瘤小鼠引流淋巴结中T细胞耗竭,促进tumour生长。黑色素瘤或前列腺ai来源的外泌体上的FasL诱导Fas依赖性T细胞凋亡。除外泌体外,配体介导的T细胞信号传导和与表达CD39(三磷酸外切核苷二磷酸水解酶1)和CD73(5′nuleotidase)的多种人类ai细胞类型来源的外泌体相关的酶活性导致T细胞中5′AMP转化为腺苷和腺苷信号传导,在体外有效限制其活化。这些作用醉终可能抑制适应性免疫应答。相比之下,肥大细胞来源的外泌体在体外和体内表达MHC-Ⅱ、CD86、LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原1)和ICAM-1(细胞间粘附分子1),诱导B细胞和T细胞的增殖。醉后,ai细胞来源的外泌体被改造为过表达CD40L(CD40配体或CD154,T细胞上的共刺激分子,与APC上的CD40结合),促进树突状细胞成熟,导致体内T细胞增殖和抗tumour活性增加。 外泌体内的miRNA、lncRNA和cirRNA表达低,检测难度大。安徽外泌体WB

外泌体主要由蛋白质和脂质组成。外泌体蛋白质组学

外泌体(exosomes)是由细胞分泌的小型双分子层囊泡,内部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物质,通过循环系统到达细胞和组织发挥远程调控作用。自身免疫性疾病(autoimmune diseases, ADs)是一组由免疫系统紊乱导致免疫复合物形成和沉积的慢性炎症性疾病,越来越多的证据表明,外泌体在多种ADs的病理机制中起着关键作用。外泌体主要通过影响细胞间通讯和免疫细胞的功能来参与ADs的发病机制,其自身水平和核酸的表达情况可以反映疾病的进展程度,是ADs的良好生物标志物。此外,外泌体具有生物相容性和稳定性,具有作为药物载体的潜力。本文系统介绍了外泌体在ADs中的生物学功能,并且分析了外泌体作为ADs生物标志和药物载体的潜在价值。外泌体蛋白质组学

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