鼻腔灌洗液外泌体粒径检测

近年来，高通量质谱分析被普遍地应用于筛选NSCLC外泌体蛋白的研究，这为我们揭示了更多具有生物标志物价值的分子。Birgitte等采用微阵列芯片技术研究了431例肺病患者和150例对照者血浆外泌体中的蛋白表达情况，发现CD151、CD171和TSPAN8这三种蛋白表达不只能区分种瘤与正常组织，同时也能区分各种肺病的组织亚型。此外，联合应用这三种蛋白诊断NSCLC的AUC达到0.74。Clark等采用纳升液联用技术（nano-ESI-LC-MS/MS）分析了来自正常支气管上皮细胞系和两个携带NSCLC细胞系的外泌体的蛋白表达谱，从中筛选出如细胞外基质金属蛋白酶诱导因子、溶酶体膜糖蛋白2等多种存在显着性差异表达的蛋白，同时检测分析这些蛋白有助于提高NSCLC诊断的敏感性和特异性。干细胞外泌体具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成等功能。鼻腔灌洗液外泌体粒径检测

外泌体大小不均可能是由于MVB的限制膜不均匀内陷，导致流体和固体的总含量不同；细胞的微环境和固有的生物学特性可能会影响外显体的含量及其生物学标记，如乳腺病细胞及其外泌体的蛋白质组可以显示来源细胞是上皮样细胞还是间充质样细胞；由于细胞表面受体表达的不同，外泌体对受体细胞的影响可能不同，可能诱导细胞存活，也可能诱导凋亡，或诱导免疫调节等；异质性也可以基于外泌体起源的组织，包括它们是否来自病细胞，瘤细胞产生的外泌体传递致瘤miRNAs明显促进瘤细胞增殖。鼻腔灌洗液外泌体粒径检测通过压制或去除这些外泌体，有希望压制疾病发生。

l 慢病毒介导CD63-GFP表达：将外泌体的特定蛋白CD63和绿色荧光蛋白GFP的表达元件构建成质粒再包装到慢病毒中，随后用此慢病毒传播细胞，使细胞分泌的外泌体带有绿色荧光。外泌体功能研究：将标记的外泌体加入受体细胞培养基中，与受体细胞进行共培养，观察细胞的功能变化，如细胞增殖、迁移与侵袭、细胞凋亡等；或者将外泌体注射入动物模型中，观察动物表型变化和检测动物相关指标。外泌体（exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜，直径大约为 30-150 nm。外泌体普遍存在并分布于各种体液中，携带和传递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。

外泌体的提取方法：免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度较高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。PS法可提取相当高纯度的外泌体。色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不宽泛。外泌体复杂的内容物被认为是疾病诊断的无创或微创生物标志物。

人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时，外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式：一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合，进而唤醒靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中，外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合，从而唤醒细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合，非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。干细胞外泌体可直接促进血管生成,改善大脑缺氧后的损伤。鼻腔灌洗液外泌体粒径检测

外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型。鼻腔灌洗液外泌体粒径检测

外泌体免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态 的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH 和非 生理性盐浓度会影响外泌体生物活性， 不便进行下一步的实验 。PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9 《Scientific Reports》 杂志发表了该方法新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。色谱法，这种方法分离到的外泌体在 电镜下大小均 一， 但是需要特殊的设备 ， 应用不普遍 。鼻腔灌洗液外泌体粒径检测

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