黑龙江血浆外泌体染色PKH67/PKH26

外泌体（Exosome）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；外泌体携带有多种蛋白质、脂类、RNA等重要信息，不只在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。外泌体（Exosomes）是细胞分泌到胞外的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大小为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。外泌体普遍存在于细胞培养上清以及各种体液中，包括血液、林巴液、唾液、尿液、、乳汁等，同时也存在于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。外泌体特指直径在40-100nm的盘状囊泡。黑龙江血浆外泌体染色PKH67/PKH26

外泌体是由各种细胞分泌的小型膜囊泡（直径30~100nm），存在于大多数体液（如血液、尿液、髓液等）和细胞培养液中。外泌体是由脂质双层膜包被的膜囊泡，产生于称为多囊泡体的细胞外囊泡中，多囊泡体通过与细胞膜融合将外泌体释放到细胞外。外泌体含核内体来源的蛋白质（如ESCRTs）、细胞内运输相关蛋白（如RabGTPase等）及细胞膜来源蛋白（如CD63, CD81等）等各种内分泌细胞来源的蛋白和RNA，同时还含有分泌细胞膜来源和内体膜来源的脂质（如胆固醇和鞘磷脂等）。黑龙江血浆外泌体染色PKH67/PKH26外泌体作为细胞间信号传导的通讯工具和作为病等各种疾病的生物标记话题比较热门。

目前的主流观点认为，外泌体的产生过程为：细胞膜内陷，形成内体（endosome），再形成多泡体（multivesicular bodies，MVB），后分泌到胞外成为外泌体。外泌体中携带有母细胞的多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息。外泌体早见于1981年，EG Trams 等在体外培养的绵羊红细胞上清液中发现了有膜结构的小囊泡，并命名为 exosome。对于外泌体的作用，当时推测为细胞排泄废物的一种方式。1996年G Raposo 等发现类似于B 淋巴细胞的免疫细胞也会分泌抗原呈递外泌体（antigen presenting vesicle），所分泌的外泌体可以直接刺激效应CD4+ 细胞的抗种瘤反应。2007 年H Valadi 等进一步发现细胞之间可以通过外泌体中RNA 交换遗传物质。随着有关外泌体研究越来越多，研究者发现它普遍参与了机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、种瘤生长于侵袭等各种生物过程中。

细胞分泌到细胞外环境中分别称为外泌体和微泡的细胞外膜泡是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。这些细胞外囊泡（EVs）表示了细胞间通讯的一个重要模式，作为膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA细胞之间传递的载体。然而，我们对于EV形成的分子机制知识的缺乏以及缺乏干扰货物包装或囊泡释放的方法仍然妨碍了其在体内生理相关性的探索。这篇综述专注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的机制。该综述描述了将外泌体定义为特定的分泌囊泡群体的物理性质，总结了其生物学效应，特别是免疫系统，讨论了分泌囊泡可能作为细胞间信使的潜在作用。外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。

在种瘤微环境中，种瘤细胞来源的外泌体能够诱导CD4+T分化为调节性T细胞，压制机体的抗种瘤免疫反应；肺病细胞分泌的外泌体含有miR-21和miR-29a，可在免疫细胞中结合并开启TLR8，使TLR介导的NF-κB信号通路活化，从而导致种瘤的生长和转移。在肺病的侵袭和转移过程中，细胞间通讯扮演着重要的角色。据有关报道称，NSCLC分泌的外泌体内TGFβ和IL10的高表达与肺病的转移密切相关。此外，开启的T细胞可以通过调控Fas信号通路增加基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达，进而促进肺病的转移。这些机制有望成为肺病医治的潜在靶点。虽然大多数外泌体都是促进种瘤的侵袭与转移，但也有报道称，外泌体miR-302b可以通过压制TGFβRⅡ来压制肺病细胞的转移与增殖。外泌体有望成为临床检测的新型疾病生物标记。黑龙江血浆外泌体染色PKH67/PKH26

近些年关于外泌体研究很普遍。黑龙江血浆外泌体染色PKH67/PKH26

l 亲脂染料标记外泌体：目前已发表的外泌体文章中，外泌体大多使用亲脂性染料进行标记，体内和体外都有较多应用。亲脂性染料主要分为两大类，一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，所以染色效果较好，应用较普遍。第二类是Di系列的亲脂性染料，包括DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光）。其中DiR的红外荧光可穿透细胞和组织，在活成像中用来示踪。黑龙江血浆外泌体染色PKH67/PKH26