新疆外泌体载药纳米的制备方法

时间:2022年10月27日 来源:

外泌体的提取方法在外泌体载药系统中应用——超高速离心法。其中超高速离心法是常用的,该方法是被誉为分离外泌体的“金标准”。因操作简单,不需要复杂的技术支持,并且成本相对较低而被广fan使用。但是该方法耗时、产率低,得到的外泌体的数量和质量很大程度上受转子的类型、转子沉降角度等因素影响,其中主要的问题就是差速离心法获得的沉淀物是外泌体,但也会有其他的囊泡、蛋白质或蛋白和RNA的聚集体。所以得到的外泌体的纯度和产量都不高。外泌体有良好的生物相容性、高生物渗透性、低免疫原性、低毒性,可作为药物载体。新疆外泌体载药纳米的制备方法

天然来源的外泌体含有众多内源性脂质、蛋白及核酸类物质,其自身句有一定的成药潜力,例如间充质干细胞来源的外泌体在组织修复领域获得了巨大成功。当外泌体用作递送载体时,一般还需人为装载药物。理想的载yao方法不jin要实现较高的载药效率,还应保留外泌体和药物的功能和完整性。目前,在不破坏外泌体膜完整性的情况下将药物有效载入到外泌体中仍是一个巨大挑战。现有的载yao方法可分为分泌前载药法和分泌后载药法。分泌前载药法通常将亲代细胞与药物共孵育(一般需要加转染试剂),使药物进入细胞质,细胞质中的药物通过主动或被动的方式被分选到外泌体中,然后通过合适的提取方法即可获得载药的外泌体。分泌后载yao方法是目前常用的外泌体载药策略,通常需要先分离提纯外泌体,再将药物载入其中。上海细胞外泌体载药实验服务外泌体作为药物载体可稳定存在于血液中,纳米级尺寸增强药物在中流部位的渗透滞留效应(EPR)。

普通的外泌体在体内易被网状内皮系统快速qing除,难以保证载药系统在到达靶部位发挥其作用前的完整性。已有相关研究证实,使用聚乙二醇衍生物对外泌体膜进行修饰,可以屏蔽网状内皮系统的识别和摄取,延长其循环时间。Kooijmans等人将EGa1纳米抗体连接到修饰聚乙二醇的胶束表面,利用合成胶束在不同温度(4℃、40℃、80℃)下与外泌体孵育,使其插入到外泌体表面。研究结果表明,当孵育温度为40℃时能较好保持外泌体膜的完整性,而且对EG-FR受体过度表达的A431细胞有较高的结合率。将同时修饰EGa1抗体和聚乙二醇的外泌体静脉注入荷瘤小鼠体内,结果显示,在注射60min后,血浆中仍可检测到外泌体的存在。

外泌体的提取方法在外泌体载药系统中应用——梯度密度离心法。外泌体的密度在1.1~1.19kg·L-1之间,因此,可以采用密度梯度离心法来分离外泌体。该方法是将超速离心结合蔗糖密度梯度或蔗糖垫结合,原理是先除去非囊泡物质,再通过梯度密度浓缩提取外泌体,该方法可以得到相对较为纯净的外泌体。传统的梯度密度方法通常需要离心16h,但是2012年,研究者使用了62~90h才分离出某些确切囊泡,因此,该方法可能不足以沉淀所有的外泌体。如果离心时间不充足,污染物质可能和外泌体保持在相同的密度层,特别是这个密度范围又比较宽。对于水溶性的药物可用电穿孔的方法将药物载入外泌体中。

甲状腺ai(thyroidcarcinoma)是一种常见的内分泌恶性中流。在甲状腺ai的所有亚型中,甲状腺未分化ai(ATC)的恶性程度很高。目前ATC缺乏有效的zhiliao药物,属于难治性恶性中流疾病,传统的放化疗疗效差,分子靶向药物jin对部分基因突变型ATC有效。硬脂酞辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoAdesat urase1,SCD1)是一种脂肪酸合成和代谢的关键调节分子,也是催化饱和脂肪酸向单不饱和脂肪酸转变的限速酶,参与细胞增殖、细胞凋亡等多种生理过程。为研究SCD1与ATC的关系,通过构建鉴定靶向SCD-1的小干扰RNA(siRNA)外泌体,分析以外泌体为载体的靶向SCD-1的RNAi基因zhiliao对ATC细胞存活的影响。细胞存活实验证明SCD-1-siRNA外泌体可抑制ATC细胞的存活,促进细胞凋亡。这一结果说明SCD-1-siRNA外泌体具有zhiliaoATC的巨大潜力。间充质干细胞外泌体既有作为载药载体的特性,还有MSC的多种生物学功能,本身也可以作为“药物”使用。黑龙江细胞样本外泌体载药实验价格比较

外泌体载阿霉素在小鼠体内的耐受量高于游离的阿霉素,增加了阿霉素对乳腺ai和卵巢ai的zhiliao指数。新疆外泌体载药纳米的制备方法

mRNA也可以作为“货物”被外泌体运输。利用多泡体(含外泌体)负载mRNA/蛋白进行中流zhiliao的研究。研究者们利用脂质体2000或病毒载体对HEK-293细胞进行转染,使其分泌的多泡体含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP,其中CD:胞嘧啶脱氨酶;UPRT:尿嘧啶磷酸核糖转移酶;EGFP:增强型绿色荧光蛋白)。将此多泡体注射至小鼠的神经鞘瘤处,并辅助注射5氟尿嘧啶(5-FC),神经鞘瘤的增长被明显抑制。这主要是由于CD和UPRT可以将5-FC转化为5氟尿嘧啶脱氧核苷酸(5-FdUMP),而后者又是胸甘酸合成酶的抑制剂,可以抑制脱氧胸甘酸的合成,从而起到抑制DNA的合成以及促进中流细胞凋亡的效果。Saydam等的研究表明多泡体/外泌体不jin可以有效输送mRNA/蛋白质,并且句有与其他抗ai药物联合zhiliao中流的潜力。新疆外泌体载药纳米的制备方法

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