外泌体提取方法

外泌体在神经系统中与神经回路的控制相关，同时各种神经退行性疾病的致病蛋白还可以通过外泌体释放到细胞外并传递到其他细胞，与病情发展密切相关。病细胞释放的外泌体含有许多与血管新生和免疫逃逸相关的分子，构建适合病细胞生长的微环境，促进病细胞的发展。另外，病细胞来源的外泌体上粘着分子的表达形式决定着症状向身体部位的转移途径。近，有报告指出脂肪细胞释放的外泌体对肝脏的遗传基因表达有控制作用。许多病毒利用外泌体的产生路径传播细胞，受病毒传播的细菌和寄生虫通过外泌体控制其他受细胞传播的细菌、寄生虫的活动。外泌体本身的惰性相当高，但它们与细胞膜融合可将所携带的物质和信号传递到受体细胞并改变其生物学功能。外泌体提取方法

液体活检是一种非侵入性的血液检测突破性技术，能早期快速地检测中流及其病灶或者转移过程中释放到血液中的循环中流细胞（circulatingtumorcell，CTC）、循环中流DNA（circulatingtumorDNA，ctDNA）和中流外泌体等中流组分。中流外泌体作为液体活检的一个重要组成，基于其内容物成分多样和稳定等优势，正成为中流标志物相关研究的热点。中流来源纳米大小的外泌体具有易通过血脑屏障、天然的归巢特性、双分子层脂质结构的稳定性和高效的生物相容性等特征。因此，中流外泌体正成为中流靶向zhiliao理想的载体，尤其是工程化外泌体更表现出很好的中流靶向干预和增强药物zhiliao的效果。黑龙江外泌体lncRNA测序高浓度集聚诱导细胞死亡的TNF-α，可使类风湿关节炎恶化。

外泌体作为药物递送载体较以往的合成系统具有多方面的优势，比如：人工递送载体具有更低的免疫原性，其含有的磷脂双分子层可与靶细胞细胞膜融合，从而避廉价核巨噬细胞系统的吞噬作用。Srivastava等开发了一种基于外泌体-金奈米粒子（Exo-GNP）的药物递送系统—“nanosomes”用于肺病的医治，研究表明该系统与单用多柔比星医治相比，前者的多柔比星释放量增加、摄取率提高、化疗毒性降低且化疗效果增强。此外，还有研究发现，使用外泌体运载紫杉醇（PTX）可显着提高病细胞对PTX的吸收，将PTX加载至外泌体中显着增加了药物细胞毒性，Exo-PTX能显着压制肺病的发展。

密度梯度离心是基于差速超高速离心的改良技术。该方法需预先利用常用的梯度液介质如蔗糖、碘克沙醇和氯化铯等，在离心管中构筑从底部到顶部密度逐渐降低的密度梯度带。根据密度梯度构建和沉降方式的不同,又可以分为速率区带离心法和等密度梯度离心法,前者主要根据颗粒的沉降速率分离,介质密度均小于外泌体密度,离心时样品在向超速离心管底部移动时,会通过密度不断增加的密度梯度区带,密度大的颗粒更容易穿过密度更高的梯度层,更快地到达管底,因此控制离心的时间很重要;等密度梯度离心法中的密度梯度区带,则会根据样品液中各种溶质成分来进行组合,离心过程中,无论离心时间多久,不同密度颗粒jin会富集到具有相同密度的梯度区带,而不会沉淀到底部。外泌体天然的可以携带遗传到靶细胞中，从而在生物学和致病过程中诱导遗传修饰。

细胞分泌到细胞外环境中分别称为外泌体和微泡的细胞外膜泡是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。这些细胞外囊泡（EVs）表示了细胞间通讯的一个重要模式，作为膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA细胞之间传递的载体。泌体是细胞内源性的小囊泡，由大多数细胞分泌。在抗原呈递细胞中的外泌体发挥作用的报道后，人们对外泌体的兴趣增强，并且观察到它们可以在体内刺激免疫应答。在过去几年中，有几个实验室报道了各种细胞类型的外泌体分泌，并讨论了其潜在的生物学功能。然而，我们对于EV形成的分子机制知识的缺乏以及缺乏干扰货物包装或囊泡释放的方法仍然妨碍了其在体内生理相关性的探索。这篇综述专注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的机制。在过去几年中，有几个实验室报道了各种细胞类型的外泌体分泌，并讨论了其潜在的生物学功能。体液外泌体融合实验

外泌体的检测和提取还遇到一个困难即：对各种外泌体的分类。外泌体提取方法

为获得外泌体的大小、浓度、形态及蛋白质组成等信息，可以通过电镜、动态光散射、纳米颗粒跟踪分析仪、蛋白质免疫印迹、酶联免疫吸附法、流式细胞仪等对外泌体进行表征。通过电镜可获得外泌体的形态信息，不同类型的显微镜由于操作环境不同，得到的外泌体形态存在差异。例如，在扫描电镜、透射电镜和原子力显微镜中，外泌体呈现囊泡独有的茶托形，可能由于样品在固定或染色过程中极度脱水，导致外泌体塌陷所致。与之相反，在冷冻电镜中外泌体呈现圆形，由于不会脱水变性，所得的外泌体形态可能更加接近囊泡的真实状态。另外，由于透射电镜和原子力显微镜具有较高分辨率，也能够提供外泌体磷脂双分子层厚度、粒径分布等信息。外泌体提取方法