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转染的注意事项：细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2×106-4×106细胞/ml时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。在三种不同密度进行细胞铺板的比较表明铺板密度较高的，CAT活性也较高。得到较高活性所需的LIPOFECTAMINE试剂的量也相应增加了。这些结果说明，对于转染相同量的DNA所需的较佳阳离子脂质体试剂的量会因细胞密度而异其可降解性对体内应用也具有重要的意义。无锡珠海细胞高效转染试剂

细胞转染的注意事项：细胞状态这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于较佳的生长状态再做。有文献说传代不要超过17代。细胞复苏后的3代左右时细胞状态较好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化。大多数已建立的细胞系都是非整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。或者，几种来源于经筛选，转染效率较高细胞亚系的细胞系现在有售。南昌细胞高效转染试剂厂家直销这会导致和转染相关的细胞行为的变化。

细胞转染，你至少要掌握以下几点：主要有下面几种方法：：化学法：磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、阳离子脂质体法；物理法：电穿孔法、显微注射法、颗粒传递法；细菌介导法：逆转录细菌、腺细菌A.阳离子脂质体法：带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。特点：简单通用，适用性广，转染效率高，重复性好，但转染时需除血清，转染效率随细胞类型变化大。由于脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会远大于悬浮细胞，所以贴壁比悬浮转染效率要高。悬浮细胞建议使用电穿孔法。B.电穿孔法：利用高压电脉冲对细胞膜的干扰，使其形成利于核酸进入的微孔。

细胞转染之PEI转染法：1.细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于35mm培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占面积达到培养皿总面积的70－90％）。将细胞置于含5％CO2的37℃温箱中孵育8-24h，当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前2h换液（用1.5ml无血清培养基置换旧的培养基）。注：PEI转染法对细胞生长有克制作用，在换液前细胞几乎不生长，所以需要密度比较大时做转染。2.制备PEI-DNA混合物以35mm组织培养皿用240μl反应总体积为例。先在无菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入质粒DNA（总量1-3μg为佳），混匀后加入等体积PEI工作液，充分混匀后室温静置20-30min，较后将这240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀后置于含5％CO2的37℃温箱孵育。瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA。

细胞转染的常用方法：磷酸钙共沉淀原理：该法可用于瞬时或稳定转染。然而因其对pH、温度和缓冲液盐浓度的微小变化十分敏感，所得结果容易出现差异，且对许多类型的细胞培养物(尤其是原代细胞)具有细胞毒性，转染效率较差。实验步骤：将核酸与氯化钙在磷酸盐缓冲液中混合，同时控制好pH、温度等条件→室温孵育，生成浓缩DNA的极小不溶性颗粒沉淀→将颗粒型沉淀分散到细胞中，促进DNA粘附在细胞表面→共沉淀通过内吞作用进入胞浆→分析细胞瞬时基因表达或者选择稳定性传染细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。南昌细胞高效转染试剂厂家直销

瞬时和稳定表达DNA转染后，转入基因的表达可以在1－4天内检测到。无锡珠海细胞高效转染试剂

细胞转染效率低下的几个大坑：1.试剂过期有时候转染效率低下，还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年，百思不得其解。较后发现，原来是Lipofectamine2000过期了。换了之后，立马成功。根据我的经验，尽量使用开封半年内的，因为过了半年后，就算没有过失效期，但是细胞毒性较大增加，而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱，影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清，会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验，其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候，较好不要换液，不要打扰细胞，让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话，会引起未转染的细胞疯狂生长。那么，什么是较佳时机呢？在20%的细胞变圆的时候，就是加血清的较佳时机。无锡珠海细胞高效转染试剂