研究所怎么做外泌体检测

    本发明涉及医学诊断仪器，具体涉及外泌体分离微流控芯片，还涉及利用外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法。背景技术：外泌体(exosomes)是一种脂质膜包裹的纳米颗粒(30-150nm)，由各种类型的细胞(正常细胞和异常细胞)通过内溶酶体途径分泌到细胞外环境。外泌体内部携带了大量来自亲代细胞的生物信息，例如蛋白质、mirna、mrna等，能反应亲代细胞的代谢状态和病理状态。同时外泌体在循环体液中含量丰富，在血液中的浓度(108-1010颗粒/ml)明显高于循环肿瘤细胞ctcs(1-100细胞/ml)。因此肿瘤细胞来源的外泌体能反应**的状态，是理想的**生物标志物。然而外泌体在临床中并未***使用，**主要的原因是外泌体尺寸小，现有技术难以将其从复杂的体液环境内分离出来。目前外泌体的分离主要依赖于超高速离心法，但是这种方法步骤繁琐，耗时长(>10h)，仪器昂贵，不能将外泌体和其它囊泡或大分子蛋白区分开来。此外市场上常见的外泌体分离试剂盒利用聚合物分离外泌体，但沉淀外泌体的同时会沉淀出大量的杂蛋白，给后续检测结果带来假阳性的结果。微流控芯片的技术进展为外泌体的分离提供了可能性，然而传统的芯片通道多为平滑的s形通道，不利于流体在通道里的混合。翌科生物专做外泌体检测服务,医学实验,医学模型构建吗？研究所怎么做外泌体检测

    并且其携带的mRNA成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质，不仅只是mRNA，exosomes所转移的microRNA同样具有生物活性，在进入靶细胞后可以靶向调节细胞中mRNA的水平。这一发现使得研究人员对exosome的研究热情激增，截止已经通过286项研究发现了41860种蛋白质、2838种microRNA、3408种mRNA。一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4,RAB5和RAB11主要出现于早期以及回收的核内体中，RAB7和RAB9主要出现于晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白（包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。其它一些外泌体中的蛋白包括多种的代谢类的酶（***DH,烯醇化酶1,醛缩酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB。怎么做外泌体分析系统做外泌体研究的公司有哪些？

    本发明的有益效果在于：本发明通过设计人字形微流控芯片，当标本通过时形成各向异性流，***形成微涡流，使外泌体与抗体充分结合，克服常规微流控芯片平滑通道因混合不均致反应不完全的弊端，用此平台靶向外泌体膜表面的生物标记物gpc1，直接将外泌体从血浆中分离出来。与标准的外泌体分离方法(超速离心法)相比，本发明的装置显示出更高的特异性(4倍的差异)和相对简洁的步骤(捕获和释放<20分钟)，并且需要较小的样品量(200μl)即可检测到pc患者和健康人的gpc1外泌体含量的差异。附图说明为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：图1为外泌体分离微流控芯片实物图。图2为外泌体分离微流控芯片结构图(a：人字形微流控芯片平面设计图；b：人字形微流控芯片立体设计图；c：电镜下的通道结构)；图3为各向异性流示意图；图4为洗脱液验证(a：外泌体捕获原理(抗原抗体结合)；b：洗脱液和中和液的滴定曲线，在10：1的比例下，ph调节至；c：通过nta技术比较pbs和buffer洗脱液的外泌体分离效果。图5为抗体浓度筛选结果(a：不同浓度抗体nta检测结果；b：平滑通道与人字形通道比较结果；c：本发明方法与超速离心比较结果)。

    外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。2007年，Valadi等发现鼠的肥大细胞分泌的exosome可以被人的肥大细胞捕获。翌科生物的外泌体做的怎么样？

试剂盒组分：1、样本前处理（1）血清、血浆、细胞培养基等液体样本，开始实验前需经过5000g,离心10min（4℃）去除碎片，取上清；（2）外泌体样本提取后使用PBS溶解，溶解后5000g,离心10分钟（4℃）去除杂质，取上清。2、操作流程：（1）在1.5mLEP管中加入样本上清（血清、血浆、外泌体溶液等）20μL，加入20μLOneStep-A20ul和1μLOneStep-L；（2）涡旋混匀后，水浴锅50℃孵育20min，95℃孵育5min；（3）13000g,15min,4℃离心，取上清；（4）在荧光定量PCR板子的每孔中按下表加入各试剂：值得推荐的外泌体研究公司。中国高效液相色谱外泌体粒径分析

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