宿迁荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐公司

时间:2022年06月07日 来源:

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    请穿实验服并戴一次性手套操作。8)本产品只作科研用途!D-荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物,存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下,D-荧光素钾被氧化,产生蓝绿色的光(560nm),当底物过量时,产生的Chemicalbook光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、哺乳动物细胞的常用报告基因。由于没有背景干扰,因此可以很容易地检测出低至。用途D-荧光素钾盐是一类在生物体中发现的能引起生物发光的杂环化合物,如萤火虫。在ATP存在下,萤光素酶将其氧化脱羧后会发光。化学研究中可用于荧光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是萤火虫荧光素酶的底物。体外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.体内研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。常州荧光素钠盐D-荧光素钾盐溶液怎么保存做D-荧光素钾盐的哪家便宜。

    普遍应用于整个生物技术领域,尤其是体内活ti成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,荧光素(底物)能够被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。萤光素酶(英文名称:Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,其中更有代表性的是一种学名为Photinuspyrali'的萤火虫体内的萤光素酶,萤火虫发光的腹部或海洋的蓝色发光波浪将大自然中生物发光奇迹呈现于世。在生物化学和分子生物学的早期,这一现象被认为是发展生物分析的有力平台。1991年,Promega发布了di一代萤光素酶分析产品,并启动了基于萤光素酶的进一步创新计划,通过持续致力于研究和创新生物发光系统建立了各种不同的分析技术Promega萤光素酶技术发光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,Promega初次提出萤火虫萤光素酶(Luc)作为一种新兴报告基因技术的应用可能性。当时的人们认为,萤火虫萤光素酶具备的生物发光特性、极高的灵敏度和快速简单的检测流程等特点,可能会对分子生物学家的研究产生重要的影响。几个月后,di一代萤火虫萤光素酶报告基因载体和检测试剂在Promega诞生,使这项新技术正式并更范围广地为全球研究人员服务。

    荧光素酶的基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中。研究者利用基因工程已经使得小鼠、家蚕、马铃薯等一些生物可以合成荧光素酶。间接体外成像是一种强大的研究手段,可以对整个动物体中的细胞群落进行分析:将不同类型的细胞(骨髓干细胞、T细胞等)标记上(即表达)荧光素酶,就可以用高敏感度的CCD相机进行对动物体内进行活ti观察而不会伤害到动物本身。在荧光素酶中加入正确的荧光素底物就可以放出荧光,而发出的光子可以被光敏感元件,如荧光探测器或改进后的光学显微镜探测到。这就使得对包括影响在内的多种生命活动进程进行观察成为可能。例如,荧光素酶可以被用于检测血库中所存血液中的红血球是否开始破裂。法医可以用含有荧光素酶的溶液来检测犯罪现场中残留的血迹。医院用荧光素酶的发光来发现特定的疾病。荧光素酶还可以作为“报告蛋白”被用于分子生物学研究中,例如,用于在转染过荧光素酶的细胞中检测特定启动子的转录情况或用于探测细胞内的ATP的水平;这一技术被称为报告基因检测法或荧光素酶检测法(LuciferaseAssay)。荧光素酶是一个热敏感蛋白,因此经常被用于研究蛋白热变性过程中热休克蛋白的保护能力。做D-荧光素钾盐测试哪个公司好?

    8.取剩余裂解液测定LacZ的活性,其读数作为内标用以矫正荧光素酶的读数。9.用矫正后的读数作图,分析数据。注:荧光素见光易氧化,已稀释未用的荧光素应丢弃。注意事项:1.荧光素酶检测试剂需在15-25℃条件下预平衡后再进行反应,而后依据具体条件进行自动或手动检测。当用液闪计数仪时,加入荧光素酶检测试剂后立即轻轻混匀。2.如果细胞裂解后不能立即对提取物进行检测,样品可以在冰上保存大约5h,在-70℃可保存数月。不要反复冻融以避免酶活性的降低。3.利用上述方法检测冷的样品时,其信号强度将下降5-15%。4.在荧光素酶活性较高的情况下,导致信号超出线性范围(信号溢出)可用裂解液将样品进行稀释。5.不要储存稀释过的样品。如果必须保存,要在稀释的样品中加入BSA至终浓度为,这样可以保持样品的稳定性。6.一些荧光仪在进行检测前需要1-2s的稳定,因此建议在开机后过一段时间再进行检测操作。荧光素酶报告基因检测主要有哪些用途?a.启动子结构分析,将启动子区域序列(通常2k左右)进行分段截短,或对特定位点进行突变,再分别构建入luciferase报告载体,检测其启动子活性。b.启动子SNP分析,一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性。南京D-荧光素钾盐测试公司有哪几家。荧光素聚乙二醇荧光素

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    室温培育30min后加入细胞孔板中,置于培养箱常规培养。2)单克隆细胞筛选转染24h后胰酶消化细胞并按1∶6比例接种到新6孔板中,同时加入实验确定的浓度G418,随后每2d更换一次培养基并维持G418筛选直至单细胞抗性克隆的出现。分别挑选单一抗性克隆至96孔板,待其逐渐增殖后转入24孔板中继续传代培养。3)荧光素酶活性鉴定阳性克隆单一抗性克隆传代至第五代时用LuciferaseAs-sayAystem检测荧光素酶活性。检测时,各克隆按1×105个/孔接种到24孔板,24h后细胞裂解液裂解12000rpm,4℃离心10min,收集裂解物,取上清10μl加入96孔白板中,向每孔加入50μl荧光素酶96microplateluminometer连续读底物,停留2s后,取10s的荧光值(RLU),每个克隆设3个复孔,保留RLU值高的细胞克隆继续传代培养,再过5代后进行荧光素酶活性检测。保留RLU值维持较高的克隆直至第30代,荧光素酶活性更高的几个克隆MCF-7-luc即为阳性克隆.各不同数量细胞克隆的荧光值检测7-luc阳性克隆细胞按细胞数将筛出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分别接种到96孔黑板中,另外一组只有细胞,一组只有培养基作对照,设置2个复孔,常规培去上清并用PBS洗两次。宿迁荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐公司

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