苏州RNA提取试剂

时间:2022年06月13日 来源:

    核糖核酸(缩写为RNA,即RibonucleicAcid),存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种,即A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T(胸腺嘧啶)。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。[1]中文名核糖核酸外文名RibonucleicAcid[1]别名RNA[1]构成磷酸,核糖和碱基[1]碱基A、G、C、U[1]本质长链状分子[1]作用引导蛋白质合成[1]目录1分类▪概述▪信使RNA▪转移RNA▪核糖体RNA▪核酶2细胞中的分布3组成结构4干扰机制5功能▪mRNA▪tRNA▪rRNA分类编辑播报概述核糖核酸人体一个细胞含RNA约10pg(含DNA约7pg)。 南京高淳区RNA哪家便宜?苏州RNA提取试剂

    [2]2.核酶特点到目前为止发现的各种核酶有以下特点。[2](1)核酶的化学本质为RNA或RN**段。有些核糖**白也有催化作用,但活性中心位于其蛋白质成分上,并不属于核酶,例如端粒酶。然而,如果核糖**白的RNA含活性中心,则该RNA组分就是核酶,例如核糖核酸酶P分子中的M1RNA。[2](2)核酶的底物种类比较少,大多数是自身RNA或其他RNA分子,并因此分为自体催化、异体催化两种类型。此外还有其他底物,例如肽基转移酶的底物是氨酰tRNA和肽酰tRNA。[2](3)核酶的催化效率比酶低得多。[2](4)核酶也具有专一性。例如,M1RNA只剪切RNA前体5′端的额外核苷酸,不剪切其3′端的额外核苷酸及其他序列。 苏州tsRNA一步法荧光定量PCR试剂盒浙江做RNA测试哪家便宜?

    [5]功能编辑播报mRNAmRNA含A、U、G、C四种核苷酸,每三个相联而成一个三联体,即密码,**一个氨基酸的信息,故按数学中排列组合法则计算,可形成43=64个不同的密码。根据实验结果,推得64个密码与氨基酸的对应关系如下表。[6]mRNA密码与氨基酸的对应关系64个密码中,61个密码分别**各种氨基酸。每种氨基酸少的只有一个密码,多的可有6个,但以2个及4个的居多数。此外,UAA、UAG、UGA这三个密码是肽链合成的终止信号,不**任何氨基酸。在真核生物中,AUG既是甲硫氨酸的密码,又是肽链合成的起始信号;而在原核生物中,GUG(在真核生物中是缬氨酸的密码)和AUG样,都是甲酰甲硫氨酸的密码和肽链合成的起始相号。可见,除GUG外,所有的密码从细菌到高等生物都能适用,这一点为生物的共同起源学说提供了有力的佐证。

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    用移液器反复吹打。【注】:加入TotalRNAExtractionReagent前应避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。C.动、植物组织取-70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨,按照表1加入适当量TotalRNAExtractionReagent混匀。或取新鲜动植物组织尽量剪碎,加入适当量TotalRNAExtractionReagent,匀浆仪进行匀浆处理。【注】:样品体积不要超过加入TotalRNAExtractionReagent体积的10%。2)将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使**白体完全解离。3)(可选)4℃,12000g离心10min,取上清。【注】:离心可去除样品中较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉,植物的块茎结节等。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时,上层是大量油脂应尽量去除,取澄清的匀浆液进行后续实验。2.总RNA提取1)向上述裂解液中加入1/5体积氯仿(如每1mLTotalRNAExtractionReagent加入mL氯仿)。盖紧离心管盖,剧烈震荡15sec,室温静置2-3min。2)4℃,12000g离心10-15min。【注】:①离心后混合物可分3层:上层无色水样层,中间层,下层红色有机苯酚氯仿层。RNA存在于水样层中。南京六合区RNA哪家便宜?徐州miRNA一步法荧光定量PCR试剂盒

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    轻轻吹3-5次混匀。B.轻轻混匀转染试剂,用50ulOpti-MEM稀释lipofectamineTM2000,轻轻吹3-5次混匀,室温下静置5min。C.混合转染试剂和siRNA稀释液,轻轻吹3-5次混匀,室温下静置20min。D.转染复合物加入到24孔细胞板中,100ul/孔,前后轻摇细胞板混合均匀。E.细胞板置于37℃、5%CO2培养箱中培养18-48h。转染4-6h后可更换新鲜培养基。3)效果检测:转染完成后24-72h均可进行siRNA沉默效果检测,更佳检测时间与细胞类型,转染试剂,检测目的等相关。1)RNA水平的检测:mRNA是检测siRNA沉默效率的更佳指标,siRNA转染后24-72h即可检测到靶基因mRNA表达明显降低,检测方法是RealtimePCR。2)蛋白水平的检测:检测方法是Westernblot。3)功能筛选:应用EdU细胞增殖、EdUTP细胞凋亡等方法进行细胞功能筛选。动物实验修饰方法:由于动物实验对siRNA稳定性的要求较高,尽管未修饰的siRNA也可以进行动物实验,但是以CHol,OMe,PS修饰的siRNA效果较好。给***法:局部给药:更直接的导入方式,siRNA的导入效率高,用量少。siRNA能很快被吸收。适用于浅表***和组织,包括眼,肌肉和皮下组织等。2表2:使用lipofectamineTM2000转染siRNA产品参考用量细胞培养容器表面积。苏州RNA提取试剂

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