无锡体外研究D-荧光素钾盐浓度

    可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。荧光素酶报告基因有许多优点：①非放射性；②比CAT及其他报告基因速度快；③比CAT灵敏100倍；④荧光素酶在哺乳细胞中的半衰期为3小时，在植物中的半衰期为3．5小时。由于半衰期短，故启动子的改变会即时导致荧光素酶活性的改变，而荧光素酶不会积累。相反，CAT在哺乳细胞中的半衰期为50小时。荧光素酶浓度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范围内，荧光信号强度与酶浓度成正比。在理想条件下，可检测到l0-20mol/L的荧光素酶。检测步骤：1．用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。2．设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。3．筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。4．扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。5．培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。6．将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。7．提取蛋白并用于荧光素酶检测。8．加入底物，测定荧光素酶的活性。9．计算相对荧光强度，并与空载对照比较。南京地区有哪些做D-荧光素钾盐测试的公司。无锡体外研究D-荧光素钾盐浓度

    可用于需要低检测限的测定具有用于研究基因调控和功能的快速，简单且均一的生物发光测定法与标准细胞生长培养基的使用兼容高斯荧光素酶近年来，其他荧光素酶（例如高斯荧光素酶）的使用有所增加，因为这些报告基因较小，并且不需要ATP的存在。高斯荧光素酶是一种20kD的蛋白质，可通过氧气催化腔肠素氧化，产生光。来自于海洋足类高斯氏菌的生物发光酶在表达后可有效地从哺乳动物细胞中分泌出来。Amplite™高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒使用专有的发光配方来定量细胞培养基中的荧光素酶活性。当该试剂与高斯荧光素酶相互作用时，产***光产物，该发光产物提供强发光。Amplite高斯荧光素酶报告基因测定试剂盒特点：提供了与HTS液体处理仪器兼容的所有基本组件它们具有高灵敏度，可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行半衰期为一小时的“辉光型”信号在大量检测板之间提供一致的信号与标准细胞生长培养基兼容海肾荧光素酶海肾萤光素酶是一种从海桑（Renillareniformis）分离的36kDa蛋白。与萤火虫荧光素酶相比，海肾荧光素酶的底物和辅因子要求不同。海肾荧光素酶在氧气存在下使用腔肠素，产生480nm的蓝光。与萤火虫萤光素酶类似。无锡体外研究D-荧光素钾盐浓度D-荧光素钾盐合作需要交押金吗？

    常见的荧光素酶有两种，分别是萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase，编码基因是luc）和海肾荧光素酶（Renillaluciferase，编码基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下，底物被氧化发光（不同底物光的颜色和波长不同），当底物过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。***成像技术（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术，生物发光法是基于荧光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化学发光的原理，将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内，与后期注射入体内的底物发生反应，利用光学系统检测光强度，间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域常用的有**或疾病动物模型的建立，并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。以下主要介绍D-Luciferin（D荧光素）的分类：D-Luciferin：有三种，分别是D-Luciferin,SodiumSalt/D荧光素钠盐、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-荧光素钾盐和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-萤火虫荧光素。

    5）对于检测灵敏度要求特别高的实验，建议使用新鲜配制的本产品。6）在进行D-荧光素钾盐的溶解时，应使用无钙镁离子的DPBS，因钙镁离子可能会抑制荧光素酶的活性，此外镁离子可能会对荧光素的氧化造成影响，从而影响检测。7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。8）本产品只作科研用途！荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够催化荧光素产生生物发光的酶的统称，其中更有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶，分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase，同时近年来研究得较多的来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（Gaussluciferase）。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)，可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。萤火虫萤光素酶更通用和更常见的报告基因是北美萤火虫photinuspyralis的荧光素酶，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性。高浓度（体内）甚至没有毒性，可用于原核和真核细胞。运输和保存运输条件：4℃冰袋运输。D-荧光素盐也算是钠盐和钾盐。

    萤光素酶（英文名称：Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，其中**有代表性的是一种学名为Photinuspyrali'的萤火虫体内的萤光素酶，萤火虫发光的腹部或海洋的蓝色发光波浪将大自然中生物发光奇迹呈现于世。在生物化学和分子生物学的早期，这一现象被认为是发展生物分析的有力平台。1991年，Promega发布了***代萤光素酶分析产品，并启动了基于萤光素酶的进一步创新计划，通过持续致力于研究和创新生物发光系统建立了各种不同的分析技术。Promega萤光素酶技术发光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月，Promega***提出萤火虫萤光素酶(Luc)作为一种新兴报告基因技术的应用可能性。当时的人们认为，萤火虫萤光素酶具备的生物发光特性、极高的灵敏度和快速简单的检测流程等特点，可能会对分子生物学家的研究产生重要的影响。几个月后，***代萤火虫萤光素酶报告基因载体和检测试剂在Promega诞生，使这项新技术正式并更***地为全球研究人员服务。随后30年里，Promega不断在萤光素酶实验工具领域推陈出新，保持技术***的地位。这里提到的萤光素酶即荧光素酶。[1]1991萤光素酶检测系统。D-荧光素钾盐荧光素酶和ATP水平分析。苏州荧光素钠盐D-荧光素钾盐活题成像原理

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    其中更有代表性的是一种学名为Photinuspyralis的萤火虫体内的荧光素酶。在相应化学反应中，荧光的产生是来自于萤光素的氧化，有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。没有荧光素酶的情况下，萤光素与氧气反应的速率非常慢，而钙离子的存在常常可以进一步加速反应（与肌肉收缩的情况相似）。[1]荧光生成反应通常分为以下两步：萤光素+ATP→萤光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi萤光素化腺苷酸+O2→氧荧光素+AMP+光这一反应非常节省能量，几乎所有输入反应的能量都被转化为光。与之形成鲜明对比的是人类使用的白炽灯，只有越10%的能量被转化为光，剩余的能量都变为热能而被浪费。荧光素或荧光素酶不是特定的分子，而是对于所有能够产生荧光的底物和其对应的酶的统称，虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。更为人所知的发光生物是萤火虫，而其所采用不同的荧光素酶与其他发光生物如荧光菇（发光类脐菇，Omphalotusolearius）或许多海洋生物都不相同。在萤火虫中，发光反应所需的氧气是从被称为腹部气管（abdominaltrachea）的管道中输入。一些生物，如叩头虫，含有多种不同的荧光素酶，能够催化同一荧光素底物。无锡体外研究D-荧光素钾盐浓度

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