常州荧光素酶D-荧光素钾盐发射波长

时间:2022年08月05日 来源:

    或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。2)用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3)去除细胞培养基。4)待图像分析前,向细胞内添加荧光素工作液,37℃孵育5-10min,然后进行图像分析。2.***成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液,混匀。2)用µm滤膜过滤除菌。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射。4)注射入体内10-15min(待光信号达到更强稳定平台期)后进行成像分析。注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定更高信号检测时间和信号平台期。注意事项1)本品(fireflyluciferin)和甲虫荧光素(beetleluciferin)只只是不同公司在命名上的差异,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid。2)注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定更佳信号平台期和更佳的检测时间。3)如果要进行ATP的检测,尽量避免外源ATP的污染,如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材,在进行荧光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。D-荧光素钾盐找南京翌科生物科技有限公司。常州荧光素酶D-荧光素钾盐发射波长

    并实现了在非常高通量的应用中使用报告基因检测。[1]随着UltraGlo™萤光素酶的发展,现在已经实现了“加样-读数”的ATP检测方法。ATP是细胞健康的重要指标,这使得CellTiter-Glo®能有效测定细胞活力,尤其是在高通量应用中。该检测原理还促进了其它ATP检测平台的诞生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo®(2004年)和ADP-Glo™(2009年)酶检测系统。[1]2003Caspase-Glo®3/7检测除了可以利用萤火虫萤光素酶反应测定样品中萤光素酶或ATP的含量外,还可以检测底物(luciferin)浓度的变化。通过将luciferin与可被不同酶类识别并产生反应的保护基团偶联,能对这些酶进行灵敏的“加样-读数”检测,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo™萤光素酶检测系统随着对萤火虫萤光素酶化学反应的进一步了解以及Promega生物学家和化学家团队的建立,一种改进的luciferin面世,能更好地用于典型的报告基因检测应用。这种新的底物——fluoroluciferin,是新型底物开发的一个早期实例。[1]2012NanoLuc®萤光素酶基于定向进化和新型底物开发方面的经验,研究人员从虾的萤光素酶改造设计出一种新型萤光素酶报告基因,即NanoLuc®萤光素酶。镇江D-荧光素钾盐使用说明做D-荧光素钾盐测试品牌有哪些?

    这是一种小分子(19kDa)单体酶,具有独特的底物,其灵敏度比已具备高灵敏度的萤火虫或海肾萤光素酶系统高约100倍。这种新型的报告基因有着***的应用前景,为进一步的技术开发奠定了基础。[1]2015NanoBRET™技术NanoLuc®的小体积和非常明亮的光输出是作为蛋白质标签的理想特征。这些特征还很适合作为生物发光共振能量转移(BRET)的供体。一项针对各种能量受体荧光基团的深入研究发现,红色光谱中的可选择性有助于消除与BRET测定相关的一些挑战。可将这些荧光基团添加到蛋白质配基等分子中以测量靶蛋白的结合,或与HaloTag®配基耦联以进行活细胞中蛋白质:蛋白质相互作用的检测。[1]2016NanoBiT®技术随着NanoLuc®的诞生,Promega的科学家努力将该报告基因改造为多亚基系统,即“NanoLuc®BinaryTechnology”或NanoBiT®。该系统由两部分组成:11个氨基酸的小标签和一个更大,更精细的NanoLuc®亚基,LgBiT。这两部分结构互补结合,重组为一个明亮的萤光素酶。这些亚基的亲和力可以和SmBiT肽一样低,从而可以进行蛋白质相互作用的测定;也可以和HiBiT一样高,从而允许自我组装。[1]2017HiBiT®技术基于NanoBiT®系统的研究。

    具体实验流程:注:该操作流程通常用来检测转染了萤火虫荧光素酶基因的真核细胞中荧光素酶表达的活性,不适用于对细菌荧光素酶进行检测。1.实验***天,消化并接种细胞(根据具体实验选择合适的细胞)于35mm细胞培养皿,置于5%CO2、饱和湿度的37℃培养箱内培养过夜。2.等细胞密度达到70%时用Luciferase报告基因质粒、LacZ的表达质粒及其它质粒(根据具体实验确定)共转染细胞(根据具体实验选择转染方法,如磷酸钙沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可)。3.转染24-36h后,吸取培养液,用预冷的PBS(无钙和镁离子)洗涤细胞。注:荧光酶的酶促反应会被痕量的钙所抑制,故用磷酸钙转染的细胞在收集细胞前应充分洗涤除去含钙介质。4.在每个培养皿中加入350μl预冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解细胞。5.在细胞裂解期间,准备足量的ml微量离心管,将ATPbuffer与luciferinbuffer以1:,每管100μl。6.依次取等体积的细胞裂解液(100μl)至步骤5中的离心管中,迅速混匀,在发光仪(Luminometer)上读取吸光值。注:发光反应会迅速衰减,将细胞裂解液加入反应液后5s内必须读取吸光值。7.确保以相同操作手法读取全部样品吸光值后。南京D-荧光素钾盐测试公司有哪几家。

    附录ⅧB),与标准硫酸钾溶液制成的对照液比较,不得更浓()。干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,减失重量不得过%(附录ⅧL)。锌盐取本品,加氯化钠的饱和水溶液10ml溶解后,加稀盐酸2ml,摇匀,滤过,滤液中加亚铁**钾试液1ml,不得发生浑浊。5鉴别方法编辑(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,点于滤纸上,即生成黄色斑点,趁湿置溴蒸气中,1分钟后再使与氨蒸气接触,斑点即变为深粉红色。(2)本品的水溶液显强烈的荧光,用大量的水稀释后仍极明显;但加酸使成酸性后,荧光即消失;再加碱使成碱性,荧光又显出。(3)本品炽灼灰化后显钠盐的鉴别反应(附录Ⅲ)。6含量测定编辑取本品约,精密称定,加水20ml溶解后,加稀盐酸5ml使荧光素析出,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,合并提取液,用水10ml洗涤,洗液再用异丁醇-氯仿(1:1)5ml振摇提取,合并提取液,置105℃恒重的容器中,在水浴上通风蒸发至干,残渣用乙醇10ml溶解后,再置水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,精密称定,残渣重量与相乘,即得供试量中含有C20H10Na2O5的重量。荧光素钠是一种有机化合物,分子式为C20H10Na2O5,橙红色粉末,无气味,有吸湿性;易溶于水,溶液呈黄红色,并带极强的黄绿色荧光。南京翌科生物科技有限公司D-荧光素钾盐比较靠谱。常州荧光素酶D-荧光素钾盐发射波长

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