脑局部缺血再灌注损伤脑梗MCAO模型课题研究

采用Longa等的5级4分法标准对模型动物进行评价，0分：无神经功能缺损症状；1分：出现左侧 Honer征，轻度神经功能缺损；2分：提尾对侧前肢内旋，肩内收，中度神经功能缺损；3分：向对侧转圈、向对侧倾倒，重度神经功能缺损；4分：不能自发行走，部分意识丧失。鼠侧倾倒，评分为3分。 沿脑桥上界面切断，去除嗅球，称全脑重，立即放入-20℃冰箱， 20 min 后取出，由前向后做连续冠状切片（切片厚度2 mm）。将脑切片置入0.1% TTC溶液中，后放入恒温振荡器中，37℃避光染色30 min，将脑切片取出后放入固定液中固定 24 h，取出脑片，相机拍照，用 Motic Images Plus 显微图像分析系统计算脑梗死面积和梗死体积。小鼠缺血性脑梗死模型也为神经康复研究提供了有力支持。脑局部缺血再灌注损伤脑梗MCAO模型课题研究

迄今为止，缺血性脑卒中模型覆盖各种小型动物（小鼠，大鼠等）和较大型动物（兔、犬、猪、猴等），并应用于卒中治*药物的临床前药理药效研究。然而，自1970年代以来，大量在动物模型上得到验证的受试药物均未能在人体临床试验中获得理想的治*效果，可能原因包括：1）以往相对简单的动物模型不能准确模拟人类卒中的病理生理过程；2）临床前动物实验的药效评价方法尚难以成功转化到复杂的人体临床试验标准。2009年国际公认的“脑卒中治*学术工业圆桌会议”（Stroke Therapy Academic industry Roundtable，STAIR）发布了临床前缺血性脑卒中药物研发准则，提出提高临床前药理药效研究质量的具体要求。近年来随着更深入的基础研究发现，更多符合人类发病机理和病理生理过程的缺血性脑卒中动物模型已被开发。脑局部缺血再灌注损伤脑梗MCAO模型课题研究建立大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型动物模型是研究此类疾病的*重要工具之一。

局灶性缺血模型/线栓法引起的大脑中动脉栓塞（Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO）由于大（小）鼠脑血管解剖结构与人类相似，大脑中动脉也是临床缺血性卒中的高发部位，同时，采用线栓法也便于观察缺血和再灌注、永jiu（持续）和短暂性损伤等多种状态，在评价药物量效关系和确认治*时间窗等方面有一定优势，因此，MCAO是目前*广为接受一种药效模型。将尼龙线由大（小）鼠的颈外动脉（ECA）插入，经颈内动脉（ECA）阻断一侧MCA起始端，导致一侧（局灶性）脑缺血。术后再使用激光散斑血流仪或多普勒血流仪对造模效果进行验证和确认。

脑梗MCAO模型成功后，水迷宫在Morris水迷宫获得性训练、探查训练和对位训练中，各组间大鼠游泳潜伏期、游泳距离和游泳速度指标均无显*差异。对位探查训练中，与假手术组相比，模型组大鼠平台所在象限时间百分比、平台所在象限时间和进入平台所在象限次数均显*减小(P<0.05，P<0.01); 旷场试验旷场实验结果显示：与假手术组相比，模型组大鼠穿越格子数显*增加(P<0.05);与模型组相比，阳性*组大鼠穿越格子数显*减少(P<0.01)。各组大鼠后肢站立次数和中*格停留时间均无显*差异。手术有一定技术难度，血管结扎不紧或结扎线脱落，会出血导致病理生理状态改变或增加死亡。

1、大脑中动脉阻塞（MCAO）模型-啮齿类 诱导方式：线栓法堵塞大脑中动脉动物种属：大鼠模型特征：模型可高度再现的MCA梗死、具有明确的缺血半暗带（有梗死风险但潜在可恢复的低灌注组织）、可再现的感觉运动和认知缺陷、可用于评估神经保护药物、不适合溶栓药物研究、动物会有死亡，尤其是缺血时间越长时、分缺血再灌注模型和永jiu缺血模型 缺血再灌注模型与永jiu梗死模型差别：缺血再灌注模型包括原发性脑组织损伤和缺氧再灌注后由能量代谢紊乱引起的继发性损伤，两种损伤之间存在时间差；永jiu梗死模型无此特征、永jiu梗死模型梗死核*区相比缺血再灌注模型更大，缺血半暗带可能更小、永jiu梗死模型动物死亡率相对更高中风的高发病率、残疾率和死亡率给家庭和社会带来了沉重的负担。上海大小鼠脑梗MCAO模型研究方案

线栓法是*常用的脑局部缺血再灌注损伤模型制备方法,此方法不需要开颅且不需要呼吸机。脑局部缺血再灌注损伤脑梗MCAO模型课题研究

缺血性卒中的病理生理及药物治*缺血性卒中主要诱发神经血管单元（NVU）一系列的缺血级联反应（包括兴奋性氨基酸毒性，氧（氮）化应激和缺血后炎症等），从而造成神经细胞受损甚至部分死亡细胞凋亡，*终诱发大脑功能的异常。NVU是由神经元，神经胶质细胞，血管细胞（内皮细胞、周细胞、平滑肌细胞）以及基底膜共同构成，这些细胞相互作用，共同调节营养物质在细胞间质间的流动和脑血流，维持和修复髓鞘，清*代谢产物，从而实现和维持大脑的正常功能。在缺血发生时，NVU的各部分细胞发生不同程度的损伤，诱发神经元细胞的生理生化异常。部分凋亡细胞会进展为梗死灶，而梗死灶周围受损的神经细胞虽然出现了生理生化异常和功能障碍，但尚未死亡，及时低灌注可能可以改善其损伤状况使之恢复正常。这部分及时抢救仍然可以改善其功能的神经细胞一般被称为“缺血半暗带”。脑局部缺血再灌注损伤脑梗MCAO模型课题研究