上海地区生工高通量测序原理

怎样通过血球计数板进行质检操作呢？将血球计数板擦拭干净，取干净的盖玻片盖在计数板上；将细胞悬液混匀（或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液），吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间；在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数；按细胞计数公式进行计算，计算公式：细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数，V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目，细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。请注意选择无RNA酶的容器盛放样本，尽量避免RNA降解。上海地区生工高通量测序原理

生工高通量测序样品要求，环境样品：如果是新鲜土壤/污泥样品，可以以冰袋运输，不超过3天;如果是冻存过的样品（-20°C或者-80°C冰箱保存），为避免反复冻融，建议用足量的干冰（根据经验，在秋冬季节，如果打包合适，3公斤块状干冰可以维持30-40小时）寄送;如果是水体样品，建议采用滤膜过滤后，将滤膜寄送来生工。生工不负责过滤。要求滤膜3张，冰袋运输，不超过3天。其余特殊环境样品，具体咨询生工高通量测序部。

DNA样品：请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。 上海地区SNP高通量测序测序Life Ion torrentPGM 运行314、316、318芯片，可以承接扩增子测序、靶区域测序、基因组重测序服务。

样本寄送时，请将填写完整的纸质版《高通量测序送样表》密封于塑料袋内，随样本一起寄出，纸质版的样本信息单用于样本接收人员在收到样本后及时并正确的保存并录入样本，如无纸质版的样本信息单可能会延误项目周期；样本管壁或管盖上标明的样本名称需要与《高通量测序送样表》里样本名称一致，这样可以避免我们收到样本后与您确认样本编号而耽误样本质检、提取实验；如有特殊情况，请在《高通量测序送样表》中注明；样品编号请避免使用中文、罗马数字、“-”以及特殊符号标示，避免分析的时候系统无法识别，导致分析无法完成；我们分析人员建议编号可以采用英文字母与阿拉伯数字结合的形式，字符比较好不要过长，避免绘制部分分析图的时候难以全部展示。

通过显微镜使用血球计数板质检能观察到悬液背景质量和细胞数目及活性的评估。让我们再来回顾一下台盼蓝染色原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。怎样通过血球计数板进行质检操作呢？将血球计数板擦拭干净，取干净的盖玻片盖在计数板上；将细胞悬液混匀（或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液），吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间；在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数；按细胞计数公式进行计算，计算公式：细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数，V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目，细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。在运输前将所有样品管集中放于大包装中。

生工CHIP-Seq，项目介绍：CHIP-SEQ 技术，即染色质免疫共沉淀与高通量测序相结合的技术。它是研究体内蛋白质与DNA 相互作用的有力工具，还可以用来研究转录因子与基因表达的关系。通过高通量测序，可以一次性得到目的蛋白在整个基因组上的结合分布，得到目的蛋白精确的结合位点以及结合基序等信息。ChIP-Seq 的原理：首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP）特异性地富集目的蛋白结合的DNA 的所属片段，并对其进行纯化与文库构建；然后对富集得到的DNA的片段进行高通量测序，将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上，从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA 区段信息。组织材料样品（提取RNA用）建议将标签用胶带贴到管壁，干冰运输。上海地区SNP高通量测序

组织材料样品（提取RNA用），请预先用液氮速冻，然后转移到干冰中运输。上海地区生工高通量测序原理

长链非编码RNA(lncRNA)测序(只限有参考基因组物种)，项目介绍：长链非编码RNAs（Long non-coding RNAs，LncRNAs）是一类转录本长度大于200 nt且不编码蛋白质的RNAs（不含rRNA），普遍存在于各种生物体内。哺乳动物基因组序列中4%~9%的序列产生的转录本是LncRNA（相应的蛋白编码RNA比例是1%）。近年来研究表明，LncRNA参与了多种重要的调控过程，如X染色体沉默、基因组印记及染色质修饰等。通过LncRNA测序，可以快速获得与其生物学过程或者疾病相关的LncRNA的表达变化，从而促进LncRNA的深入研究。上海地区生工高通量测序原理

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