上海无参转录组高通量测序原理

生工人、大、小鼠全基因组测序，项目介绍：人或者大、小鼠全部基因组重测序，研究其突变信息（包括SNP/InDel/CNV/SV），并注释突变位点信息。该技术可同时获取编码区及非编码区突变信息，被广泛应用于遗传病、tumour及其它其它疾病研究中。测序平台：HiSeq XTen平台进行PE150测序。生工微生物基因组测序，项目介绍：微生物基因组重测序（有参）目前越来越多的微生物基因组被解析出来了。从而使得科研工作者们可以对某些物种微生物进行进行物种进化、种群特征、选择压力等研究。利用高通量测序技术，对有参考基因组微生物进行多个体的基因组重测序，精细分析其与参考基因组的SNP、InDel、SV等变异信息。单细胞转录组测序指在单细胞水平上对 mRNA 进行高通量测序和分析的技术。上海无参转录组高通量测序原理

对于微生物样品，请客户如实声明所属物种；对于可能致病的微生物，生工将拒收。以固体培养基培养的样品，需将样品从培养基上刮取下来，用干冰寄送；以液体培养基培养的样品，需离心后弃培养液收集样品，用RNA组织保存液（例如RNA-Be-Locker A）保存，以干冰或冰袋寄送；没有RNA组织保存液的情况下，也可用液氮或干冰乙醇速冻，保存于-80°C 冰箱，埋于足量干冰寄送。***样品送样量需至少达到100 mg/样；细菌样品送样量需至少达到107（10的7次方）数量级，同时，在与样本一同寄送的送样表上，标明属于革兰氏阳性菌（G+）还是革兰氏阴性菌（G-）。上海生工高通量测序NGS组织材料样品（提取RNA用）建议将标签用胶带贴到管壁，干冰运输。

通过显微镜使用血球计数板质检能观察到悬液背景质量和细胞数目及活性的评估。让我们再来回顾一下台盼蓝染色原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。怎样通过血球计数板进行质检操作呢？将血球计数板擦拭干净，取干净的盖玻片盖在计数板上；将细胞悬液混匀（或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液），吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间；在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数；按细胞计数公式进行计算，计算公式：细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数，V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目，细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果：明场（细胞未染色）：主要可以观察悬液背景质量（背景干净，无杂质碎片，无细胞团块）；台盼蓝场（细胞与台盼蓝染色后）：主要可以观察活性（主要为活细胞，未染色蓝色的为活细胞）；通过台盼蓝场计算活率：90%>80%；细胞浓度:710cells/µl;等结果来看，血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准，属于高质量单细胞悬液。以上就是我们本次的单细胞悬液质检指南分享啦。寄送 RNA 样品请置于 1.5 ml 离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用 Parafilm 封口。

生工高通量测序样品要求，环境样品：如果是新鲜土壤/污泥样品，可以以冰袋运输，不超过3天;如果是冻存过的样品（-20°C或者-80°C冰箱保存），为避免反复冻融，建议用足量的干冰（根据经验，在秋冬季节，如果打包合适，3公斤块状干冰可以维持30-40小时）寄送;如果是水体样品，建议采用滤膜过滤后，将滤膜寄送来生工。生工不负责过滤。要求滤膜3张，冰袋运输，不超过3天。其余特殊环境样品，具体咨询生工高通量测序部。

DNA样品：请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。 近年来，随着高通量测序技术的发展和普及，单细胞测序技术发展十分迅速。上海lncRNA高通量测序NGS

目前，生工生物已开展10x单细胞转录组测序（scRNA-seq）服务，如果正好您有需要，那就快快来call我们吧！上海无参转录组高通量测序原理

悬液制备好后质检结果的判断也是大家需要掌握的必备技能。单细胞悬液质检关卡究竟是怎样运作的呢？单细胞悬液质控要求：•细胞浓度：700-1200cells/µl；•细胞活率>80%（当细胞悬液活率低于70%时建议进行去除死细胞处理）；细胞团及碎片杂质<5%（无细胞粘连，无明显的细胞碎片和细胞团，并保证细胞的完整性）；•细胞状态：细胞直径在7-40um之间（细胞直径过大则建议进行抽核处理）；•不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。上海无参转录组高通量测序原理

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