上海地区转录组高通量测序NGS

扩增子测序，项目介绍：随着基因编辑技术（尤其是CRISPR-cas9技术）的发展，科研人员使用传统的Sanger测序技术无法快速有效鉴定基因编辑效率。但是，通过对靶基因区域附近设计引物，进行PCR扩增，并对PCR产物进行高通量测序，可以快速高效的获得目标区域的突变频率信息，尤其是对低频突变的检测效果远远优于一代测序，性价比极高。16S全长分类测序，项目介绍：16S全长测序分析主要是对 16S rRNA基因全长进行扩增，基于PacBio 测序平台测序. 相比较二代测序只选择 1-2 个高变区进行测序，三代可以获得全长的 16S 序列，更多变异区信息可以提高物种鉴定的分辨率，还可以提高对于群落组成的鉴定的精度。另外，针对fungus/真核生物，也可以采用类似的办法，扩增ITS/18S全长，进行物种分类测序，提高鉴定精度。高通量测序技术是可以平行对数百万甚至数十亿条序列测序的技术。上海地区转录组高通量测序NGS

对于微生物样品，请客户如实声明所属物种；对于可能致病的微生物，生工将拒收。以固体培养基培养的样品，需将样品从培养基上刮取下来，用干冰寄送；以液体培养基培养的样品，需离心后弃培养液收集样品，用RNA组织保存液（例如RNA-Be-Locker A）保存，以干冰或冰袋寄送；没有RNA组织保存液的情况下，也可用液氮或干冰乙醇速冻，保存于-80°C 冰箱，埋于足量干冰寄送。***样品送样量需至少达到100 mg/样；细菌样品送样量需至少达到107（10的7次方）数量级，同时，在与样本一同寄送的送样表上，标明属于革兰氏阳性菌（G+）还是革兰氏阴性菌（G-）。上海市转录组高通量测序组织材料样品（提取RNA用）建议将标签用胶带贴到管壁，干冰运输。

AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一种小分子染料，可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；碘化丙啶（PI）只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光，通过标记出的绿色荧光和红色荧光就可以辨别出活细胞和死细胞，这种特异性染色的方法也可以排除无核细胞、杂质、碎片等的干扰。荧光细胞计数仪检测结果可以让我们直观的看到：细胞浓度（总细胞，活细胞，死细胞）、细胞存活率（台盼蓝和双荧光AO/PI染色）、细胞平均直径、细胞聚团率、细胞直径分布等结果的展示。

转录组测序，项目介绍：RNA-Seq，是基于新一代测序技术的转录组学研究方法：首先提取生物样品的全部转录的 RNA 并进行 mRNA 富集，然后反转录为 cDNA 后进行新一代高通量测序，在此基础上进行短片段拼接组装，从而获得一个个单独转录本，进而可以对该生物样品当前状态的基因表达状况有全局了解。对不同阶段或部位生物样品的转录组进行 比较分析，则可以在转录层面得到基因表达水平的变化，针对关键基因则可以进行代谢通路（Pathway）的构建。如果是水体样品，建议采用滤膜过滤后，将滤膜寄送来生工。

悬液制备好后质检结果的判断也是大家需要掌握的必备技能。单细胞悬液质检关卡究竟是怎样运作的呢？单细胞悬液质控要求：•细胞浓度：700-1200cells/µl；•细胞活率>80%（当细胞悬液活率低于70%时建议进行去除死细胞处理）；细胞团及碎片杂质<5%（无细胞粘连，无明显的细胞碎片和细胞团，并保证细胞的完整性）；•细胞状态：细胞直径在7-40um之间（细胞直径过大则建议进行抽核处理）；•不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。生物信息分析经验丰富，可以满足客户标准分析到定制分析作图的需求。上海地区多重PCR高通量测序

于微生物样品，请客户如实声明所属物种，对于可能致病的微生物，生工保留拒收的权利。上海地区转录组高通量测序NGS

RNA类高通量测序样品要求：对于需要进行 RNA 抽提的样品，请使用新鲜取样的实验材料，当场分成小块（动物样品厚度需小于0.5 cm，植物样品厚度需小于0.3 cm）后立即用液氮或干冰乙醇速冻，保存于-80°C 冰箱，埋于足量的干冰（根据经验，在秋冬季节，如果打包合适，5 公斤块状干冰可以维持 50 小时，而小块的干冰能更好的包裹样品,但需比块状干冰多加些）中用保温箱寄送。一般组织样品，送样量至少200 mg/样；如果样品属于孢子，送样量至少500 mg/样。上海地区转录组高通量测序NGS

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