靶向捕获高通量测序项目

KBSeq全质粒测序跟一代测序相比有什么优点呢？一代测序：1.数据质量，套峰，双峰等情况，需要人工分析校对。2.测序长度，1 kb。3.成本，低。4.样本用量，100 ng。5.精确度，70-90%。6.测序能力，需要测序引物，只能测测序引物间的片段序列。7.通量低，（与读长有关）。8.实验周期，如果片段长度超过5K，测通可能需要15天左右。对于测序长度较长，如果我们用Sanger测序往往需要花费大量的时间，而我们KBSeq全质粒测序则只需要5-7天，就可以测通片段长度小于30kb以下的片段。KBSeq全质粒测序对于样本的量，要求的也比较少，比如质粒我们的样本要求DNA的浓度需≥ 1 ng/μl, 体积需≥5 μl，如果比较珍贵的样本或者是样本比较难提取的，KBSeq就更为适合了。KBSeq全质粒测序对于样本的量，要求的也比较少。靶向捕获高通量测序项目

对于细胞样品，送样量需达到 5 × 106（5乘10的6次方）数量级。富集后置于 2 ml Ep管中，用 1 ml TRIzol 重悬，注意取样后立即用液氮或干冰乙醇速冻，保存于-80°C 冰箱，埋于足量的干冰中用保温箱寄送。强烈建议细胞样品先做细胞鉴定及支原体/衣原体污染之后，再送出来。对于血液样本，只接收未冻存过的抗凝血新鲜样本。抗凝剂不可使用肝素钠，可用EDTA或ACD抗凝剂，取血后以冰袋保存，切记不能使血液冻结，从取血之时开始计算，须在48小时之内送达生工上海总部高通量测序部。如果不能提供新鲜样本，则请提供从血液中提取的总RNA样本。备样要求详见B、RNA 样品。上海地区转录组高通量测序项目单细胞转录组测序指在单细胞水平上对 mRNA 进行高通量测序和分析的技术。

生工高通量测序样品要求，环境样品：如果是新鲜土壤/污泥样品，可以以冰袋运输，不超过3天;如果是冻存过的样品（-20°C或者-80°C冰箱保存），为避免反复冻融，建议用足量的干冰（根据经验，在秋冬季节，如果打包合适，3公斤块状干冰可以维持30-40小时）寄送;如果是水体样品，建议采用滤膜过滤后，将滤膜寄送来生工。生工不负责过滤。要求滤膜3张，冰袋运输，不超过3天。其余特殊环境样品，具体咨询生工高通量测序部。

DNA样品：请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。

AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一种小分子染料，可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；碘化丙啶（PI）只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光，通过标记出的绿色荧光和红色荧光就可以辨别出活细胞和死细胞，这种特异性染色的方法也可以排除无核细胞、杂质、碎片等的干扰。荧光细胞计数仪检测结果可以让我们直观的看到：细胞浓度（总细胞，活细胞，死细胞）、细胞存活率（台盼蓝和双荧光AO/PI染色）、细胞平均直径、细胞聚团率、细胞直径分布等结果的展示。如果你的样品是质粒或者是菌液，那为什么不试试我们的KBSeq呢？

如果你的样品是质粒或者是菌液，那为什么不试试我们的KBSeq呢？准确、迅速，可以说是KBSeq的代名词了，关键是还可以省钱，估计这是很多小伙伴们一定会说，你这个服务单价可比Sanger贵多了，怎么可能会省钱呢？Sanger测序的价格：常规的一代测序基本上要每800 bp就测一个反应，那我们来算一下14000/800=17.5，那基本上就要测18个反应了，按照现在生工官方的价格区间，这个属于反应数在10-49个反应之间的，那每个反应的价格为26元，这样算下来18*26=468元，还要加上引物合成的费用，实验周期的话大概率是要超过15天的。KBSeq全质粒测序的价格：序列长度属于6-15 kb之间，159元，实验的周期大概在5-7天左右。X仪器本身有16个通道（Controller为8通道），每个通道极限多捕获20000个细胞（Controller为10000个细胞） 。上海地区多重PCR高通量测序高通量

Illumina HiSeq2500/4000 可以运行PE150/PE250模式。靶向捕获高通量测序项目

生工CHIP-Seq，项目介绍：CHIP-SEQ 技术，即染色质免疫共沉淀与高通量测序相结合的技术。它是研究体内蛋白质与DNA 相互作用的有力工具，还可以用来研究转录因子与基因表达的关系。通过高通量测序，可以一次性得到目的蛋白在整个基因组上的结合分布，得到目的蛋白精确的结合位点以及结合基序等信息。ChIP-Seq 的原理：首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP）特异性地富集目的蛋白结合的DNA 的所属片段，并对其进行纯化与文库构建；然后对富集得到的DNA的片段进行高通量测序，将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上，从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA 区段信息。靶向捕获高通量测序项目

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