上海地区靶向捕获高通量测序产品

使用显微镜进行悬液质检操作时应注意：1.使用血球计数板时，可以提前镜检观察每小格计数室内是否洁净无杂质。若有杂质灰层，则需要多次清洗，直至计数室洁净无瑕；2.质检前将悬液轻微震荡或使用扩口***头吹打混匀；3.台盼蓝染色后需要尽快完成细胞计数，一般建议不要超过10分钟；4.如果方格中细胞数目过多，难以数清，应当对细胞悬液进行稀释以便于计数；5.对于压在方格界线上的细胞应当计数同侧相邻两边上的细胞数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。DNA样品请用1.5 mL离心管装好并用封口膜封好，并安置于50 mL离心管内或其他类似容器里，并旋紧盖子。上海地区靶向捕获高通量测序产品

生工靶向捕获测序，项目介绍：利用序列捕获技术将基因组特定区域DNA捕捉并富集后进行高通量测序的基因组分析方法。全外显子测序即通过对某一基因组中的所有外显子进行测序从而获得所有外显子区域内的突变信息。由于该技术在临床上的潜力，被《科学》杂志评为2010年科学进展之一。外显子组测序可用于寻找单基因疾病、复杂疾病（如糖尿病、肥胖症等代谢综合症）、甚至是cancer的致病基因或易感基因。生工生物采用Aglient SureSelect系列外显子捕获系统，可以高效富集人全外显子区域，并结合Illumina XTen测序平台进行深度测序。后期可以完成SNP/InDel/CNV等变异检测，形成完整的分析报告。高通量测序公司生工一直秉持只要生工已经标准化的分析内容（以生工分析报告模板为准），全部无费用。

悬液制备好后质检结果的判断也是大家需要掌握的必备技能。单细胞悬液质检关卡究竟是怎样运作的呢？单细胞悬液质控要求：•细胞浓度：700-1200cells/µl；•细胞活率>80%（当细胞悬液活率低于70%时建议进行去除死细胞处理）；细胞团及碎片杂质<5%（无细胞粘连，无明显的细胞碎片和细胞团，并保证细胞的完整性）；•细胞状态：细胞直径在7-40um之间（细胞直径过大则建议进行抽核处理）；•不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。

生工高通量测序样品要求，RNA样品：请提供浓度≥750 ng/μl、总量≥2μg的总RNA样品，样品请去蛋白并进行DNase处理;请务必提供每个样品具体的浓度、体积、制备时间以及物种来源。比较好附上QC数据，可以是电泳胶图、分光光度值、Nanodrop仪器检测数据或者Agilent Bioanalyzer仪器检测数据等;一般情况下，转录组测序需要Agilent Bioanalyzer仪器检测获得的总RNA 28S:18S≥1，RIN≥7;小RNA测测序不可采用常规柱式总RNA提取试剂盒，可选择传统总RNA提取法（如乙醇沉淀、异丙醇沉淀等）或者选用专门的小RNA提取试剂盒;寄送RNA样品请置于1.5 ml离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用Parafilm封口。在运输前将所有样品管固定于50 ml带盖离心管中，再将50 ml管放在封口袋中。使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。Illumina HiSeq2500/4000 可以运行PE150/PE250模式。

单细胞测序技术的应用：单细胞测序技术可以检测复杂组织中单个细胞不同的生物学特性，这可以极大的帮助我们进一步了解细胞与细胞之间的差异。"这几乎就像通过几颗星星看到了整个宇宙。"哈佛大学分子和细胞生物学教授 Alexander Schier的这句话应用在这里也是很合适了。这幅图正是来自于在2018年4月 Science 杂志发表的三篇[8-10]来自哈佛医学院和哈佛大学的研究人员关于单细胞基因测序文章中的一幅结果图，Alexander Schier教授也是其中一篇文章的作者。这几篇文章使用多种检测技术组合，其中包括对数千个发育中的斑马鱼和青蛙胚胎单细胞测序，在胚胎发育建议初的24小时内追踪单个细胞的发育情况，可以揭示出胚胎细胞何时何地转变为新的细胞状态和类型并向我们展示了组织和整个机体从单细胞发育的完整历程。寄送 RNA 样品请置于 1.5 ml 离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用 Parafilm 封口。上海地区靶向捕获高通量测序产品

X仪器本身有16个通道（Controller为8通道），每个通道极限多捕获20000个细胞（Controller为10000个细胞） 。上海地区靶向捕获高通量测序产品

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果：明场（细胞未染色）：主要可以观察悬液背景质量（背景干净，无杂质碎片，无细胞团块）；台盼蓝场（细胞与台盼蓝染色后）：主要可以观察活性（主要为活细胞，未染色蓝色的为活细胞）；通过台盼蓝场计算活率：90%>80%；细胞浓度:710cells/µl;等结果来看，血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准，属于高质量单细胞悬液。以上就是我们本次的单细胞悬液质检指南分享啦。上海地区靶向捕获高通量测序产品

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