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CCK-8（CellCountingKit-8）细胞活性和增殖检测是医学研究中常用的实验技术，其原理是该试剂中含有WST-8，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。以下是CCK-8检测的具体步骤：细胞活性检测1.在96孔板中接种细胞悬液(100ml/孔)。将培养板放在培养箱预培养(在37℃，5%CO2的条件下)。CCK8系列简称终于来了.湖北celltiter glo 与cck8

CCK8的优点：方法方便，不用洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；CCK-8快速检测；CCK-8检测灵敏度高，细胞密度低也可以检测；CCK-8的重复性优于MTT法；CCK-8对细胞的毒性很小；CCK-8细胞活性检测试剂中是1瓶溶液，不需要现用现配，即开即用。CCK8的缺点：相比于与MTT法，CCK8的价格比较昂贵生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。用途：***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。天津cck8 原理用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值.

CCK8检测原理图2操作步骤1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5%CO2）。2、细胞处理（不同实验处理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。5、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。6、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育2小时左右就可以了。6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度（使用酶标仪之前要提前开启10min预热）测定完成后，保存数据。7.连续五天检测，每天保持一样的时间点加入CCK-8溶液，在培养箱内孵育时间相同。注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。不同的种板数对检测***的IC50影响大吗？

3、24小时后，吸出培养基，对照组和空白组每孔各加入100ul无血清培养基，实验组每孔加入100ul基础培养基配制的***，继续作用12或24小时；4、***作用完毕后，每孔加入50ulMTT,继续作用4小时；5、弃掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或异丙醇。然后震荡10分钟，使孔底的紫色结晶充分溶解；6、在酶联免疫机器上测定吸光度，波长为550nm或490nm。7、细胞存活率=（实验组吸光度值-空白组吸光度值）/(对照组吸光度值-空白组吸光度值)***。MTT与CCK8区别是什么?湖北cck8数值

请问合适的种板数是怎么定义的呢?湖北celltiter glo 与cck8

读数前可在摇床上温柔混匀，酶标仪在 450nm 波长处检测每孔的吸光度。

***率（％）= [（对照孔吸光度-实验孔吸光度）/（对照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事项

CCK8法检测细胞生长情况基于的原理是脱氢酶催化的反应，如果实验处理条件中存在还原剂的影响，应事先去除。如果实验条件中存在还原物质，需单独测定还原物质的空白吸光度。如果还原物质的吸光度很小，可以忽略不计；但如果吸光度很大，则需要去除培养基，再用培养基洗涤细胞3次，然后再加入新的 100ul培养基和10ul CCK-8 溶液进行检测。 湖北celltiter glo 与cck8