浙江dojindo cck8 说明书

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时该方法已被***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选以及药敏试验等。浙江dojindo cck8 说明书

细菌***对CCK8检测的影响：我们做***的，经常会做到细菌或***对细胞的影响。那这种情况下我们应该怎么办。其实细菌防御系统还是非常强大，单独和CCK-8在一起孵育时，不会发生还原反应，几乎不会和细菌发生显色反应。而细菌不需要入胞繁殖，所以结果还是可信的。**讨厌的就是***，我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的，而且需要借助细胞的东西来进行繁殖。繁殖过程中就需要消耗宿主的能量，会产生氧化还原反应，所以我用CCK-8来测定***对细胞活性的影响或者某个***对***复制的影响时，我都小心翼翼的测很多个时间点，说实话，效果不是很好。所以我比较喜欢中性红。天津cck8生长曲线细胞数用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

切记一定要使用无血清的基础培养基，一是可以排除血清对细胞生长的影响；二是血清的存在会对吸光度的测量产生影响。以上是MTT比色法的介绍，MTT比色法因为涉及到吸出培养基溶解沉淀的操作，所以更适用于贴壁细胞，悬浮细胞比较好选用CCK8检测细胞增殖，下面给大家介绍一下CCK8操作的注意事项。CCK8实验操作CCK8的优势在于对细胞没有毒性，可以直接加入细胞中长时间孵育，而不用考虑试剂本身对细胞带来的影响。向各孔中加入10ul的CCK-8检测溶液。如若检测的细胞增殖或毒性试验，需在此之前加入作用***培养适当时间，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8检测液。

特点不同1、CellCountingKit-8：灵敏度高，数据可靠，重现性好；操作简便，省时省力；水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞；无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低；适合于高通量***筛选。2、MTT法：特点是灵敏度高、经济。三、应用不同1、CellCountingKit-8：主要用途为***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选、细胞毒性试验以及**放射敏感性测定等。培养板周围一圈孔培养液容易挥发，为减少误差，建议培养板周围的四边每孔只加培养基。

cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。再说一下关于种板设置问题。众所周知周围一圈孔因为边缘效应都是不用来做实验的。一般每组样品我会设置6个复孔，得到的OD值去掉**大值与**小值，其余取平均值。我用的是排***，会省很多力气，但是也会增大组内误差。这个只有通过校正移液***和选用**适***头了。能力有限，表达不清的大家凑合着看看吧。有疑问的欢迎大家留言讨论，我们的目标是共同进步CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8，也就是进行细胞计数的一个盒子。湖北原理cck8

**药敏试验：这个是用的比较广的，我见过做**的团队，买CCK-8都是一整箱，一整箱的买。浙江dojindo cck8 说明书

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人**终采用的是后者。浙江dojindo cck8 说明书