上海cck8转染

摸条件包括1、种板数；2、种板后细胞的贴壁生长时间；3、加药后的孵育时间；4、cck8试剂加入量；5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多，其实这就是一个实验。而且都是种的空白板，也就是不加药物，只加细胞和CCK8。我没有做过MTT实验，但其实原理及目的都是一样的（反应机理不一样）。都说CCK8简单点而且数据更稳定，所以就用了这个试剂盒。

当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，但供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。

使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂.上海cck8转染

二、优点：·使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；·CCK-8法能快速检测；·CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；·CCK-8法的重复性优于MTT法，MTT实验生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有机溶剂溶解；而本方法产生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差；·CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取比较好测定时间，与MTT方法相比线性范围更宽，灵敏度更高；·CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。上海东仁cck8MTT与CCK8区别是什么?

酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

· CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。

· CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。

· 当在培养箱内培养时，培养板**外一圈的孔**容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，**外一圈的孔加培养基或者PBS，不作为测定孔用。

· 在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑***的吸收，可在加入***的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。

五、实验注意事项：·若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。·如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。·当使用标准96孔板时，贴壁细胞的**小接种量至少为1,000个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μl培养基)。与MTT相比，CCK-8和XTT的价格比较贵。

3、24小时后，吸出培养基，对照组和空白组每孔各加入100ul无血清培养基，实验组每孔加入100ul基础培养基配制的***，继续作用12或24小时；4、***作用完毕后，每孔加入50ulMTT,继续作用4小时；5、弃掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或异丙醇。然后震荡10分钟，使孔底的紫色结晶充分溶解；6、在酶联免疫机器上测定吸光度，波长为550nm或490nm。7、细胞存活率=（实验组吸光度值-空白组吸光度值）/(对照组吸光度值-空白组吸光度值)***。请问合适的种板数是怎么定义的呢?江苏cck8实验标准曲线制作

CCK8系列简称终于来了.上海cck8转染

cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。再说一下关于种板设置问题。众所周知周围一圈孔因为边缘效应都是不用来做实验的。一般每组样品我会设置6个复孔，得到的OD值去掉**大值与**小值，其余取平均值。我用的是排***，会省很多力气，但是也会增大组内误差。这个只有通过校正移液***和选用**适***头了。能力有限，表达不清的大家凑合着看看吧。有疑问的欢迎大家留言讨论，我们的目标是共同进步上海cck8转染