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铜绿假单胞杆菌在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130摄氏度以下的低温中能减少冰晶的形成。细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞较容易受损的-5~0摄氏度,细胞仍能生长,活力受损不大目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。合适的铜绿假单胞杆菌温度通常在45~68摄氏度之间(预备实验可2摄氏度间隔进行)。另外,由于在60~68摄氏度间,也有很高的活性,因此可在此温度范围内设定铜绿假单胞杆菌温度,进行2StepPCR。铜绿假单胞杆菌温度为68摄氏度时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68摄氏度以下时,时间设定可稍长一些。铜绿假单胞菌菌体细长且长短不一。合肥CMCC(B)10104供应价格
铜绿假单胞菌亦称绿脓杆菌,为专性需氧菌。用传统半固体培养基保存绿脓杆菌的方法,一般3个月左右就需再次移种;若保存到半年则有存活率低、复苏后色素不明显、长期保存易发生变异等缺点。应用较低温甘油保存法后,现已保存两年多,菌种存活率高达100%,且细菌的微生物特性未发生变异,该方法明显优于传统的半固体保存方法,较低温甘油保存法需要配制无菌肉汤,称取牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g,氯化钠0.5g,加入1000毫升蒸馏水中,加热溶解,调pH至7.4~0.2。按每管1.7毫升分装于华氏管中,121.3摄氏度、20分钟高压灭菌。合肥CMCC(B)10104供应价格铜绿假单胞菌的菌体有时呈球杆状或线状,成对或短链状排列。
铜绿假单胞菌为直或稍弯的革兰氏阴性杆菌,是无核细菌,以极生鞭毛运动,不形成芽孢,化能有机营养,严格好氧,呼吸代谢,从不发酵。普遍分布于自然界,如土壤、水、食物和空气中。营养要求不高,种类多,铜绿假单胞菌为需氧的革兰阴性小杆菌。铜绿假单胞菌菌体呈杆状或略弯曲,有单端鞭毛或丛鞭毛,有荚膜,无芽胞。铜绿假单胞菌菌属中有些菌株在代谢中能产生多种水溶性的色素,如绿脓素、荧光素、红脓素、黑脓素等,有的菌可产生多种,有的只产生1—2种。铜绿假单胞菌与荧光似单胞菌和恶臭假单胞菌的鉴别,三者均可产生荧光色素,但铜绿假单胞菌42摄氏度时生长,后两者则不能生长。
铜绿假单胞菌为需氧或兼性厌氧菌,在普通培养基上易于生长,培养适宜温度为35度,PH值为7.2。普通琼脂形成光滑,微隆起,边缘整齐波状的中等大菌落。由于产生水溶性的绿脓素(呈蓝绿色)和荧光素(呈黄绿色),故能渗入培养基内,使培养基变为黄绿色。数日后,培养基的绿色逐渐变深,菌落表面呈现金属光泽。普通肉汤均匀混浊,呈黄绿色。液体上部的细菌发育更为旺盛,于培养基的表面形成一层很厚的菌膜。但普遍使用有效抗生养素后筛选出的变异株常丧失其合成能力。由于铜绿假单胞菌能产生绿脓酶,可将红细胞溶解,故菌落周围出现溶血环。铜绿假单胞菌含有O抗原(菌体抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。
铜绿假单胞菌的液氮较低温保存法,将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中,密封于安瓿管内,然后控制冷却速度,使安瓿管温度逐步下降至-35摄氏度时,即可置于-150摄氏度~-196摄氏度的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物,都可用此法保存。微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染,斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时更换新的菌种。铜绿假单胞菌中的原内毒养素蛋白质是一种高分子、低毒性,原性强的保护性抗原。安徽CMCC(B)10104二代菌种规格
如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长,铜绿假单胞菌在液体表面形成菌落。合肥CMCC(B)10104供应价格
铜绿假单胞菌在4摄氏度不生长而在42摄氏度可以生长。触酶实验阳性;365nm紫外灯下显荧光;乙酰胺肉汤实验阳性。噬菌体分型所应用的噬菌体现有24株,分型率达90%。血清学分型利用O抗原进行分型,可分20个血清型。质粒指纹图分析是对同种细菌的不同株进行同源性分析的一种方法。根据细菌携带质粒的情况进行分析。铜绿假单胞菌普遍存在,而在潮湿环境尤甚。铜绿假单胞菌是假单胞菌目中的一种。因为经培养后成绿色,与铜生锈后的绿色相同而命名。以前也叫绿脓杆菌,属于革兰氏阴性杆菌。普遍存在于假单胞菌属的其他细菌以及肺炎杆菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等g-细菌中,是一种良好的交叉保护抗原。合肥CMCC(B)10104供应价格
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