吉林植物荧光寿命成像操作步骤

时间:2023年03月02日 来源:

荧光寿命显微成像技术(FLIM)具有对生物大分子结构、动力学信息和分子环境等进行高分辨高精度测量的能力,因此其重要性日渐提升,被普遍地应用于生物学研究及临床诊断等领域。荧光寿命成像的发展很好地弥补了基于强度成像的问题,对生物医学检测有着重要的意义。荧光的特性包含有:荧光激发和发射光谱、荧光强度、量子效率、荧光寿命等,其中,荧光寿命是指荧光分子在激发态上存在的平均时间(纳秒量级)。分子的荧光寿命在几纳秒至几百纳秒之间,因此,测量荧光寿命需要极快响应时间的探测器。荧光寿命显微成像具有高特异性、高灵敏度、可定量测量微环境变化。吉林植物荧光寿命成像操作步骤

荧光寿命成像的原理:如果分子环境刺激激发态衰变而不发射光子,则荧光强度会降低(淬灭)。荧光淬灭是一条单独的发射路径,因此在动力学上与荧光过程形成竞争关系。激发态存储现在可以通过一个以上的过程衰变,从而缩短荧光寿命。这种寿命的改变可用于收集分子环境的信息。一种特殊类型的淬灭是将激发能量以非辐射的方式传递到相邻的不同荧光染料中:“荧光共振能量转移”,FRET。此时,不只第1个荧光染料(供体)变暗,寿命变短,而且第二个荧光染料(受体)在“错误的”激发颜色下开始发光。由于这种效果的产生需要两种荧光染料(小于10 nm)的密切接触,因此将其用作研究分子相互作用的“分子标尺”。辽宁单分子荧光寿命成像订购荧光寿命成像(FLIM)可用于测量分子环境参数,通过荧光共振能量转移进行的蛋白质相互作用。

荧光寿命显微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是荧光寿命测量和荧光显微技术的结合,荧光寿命显微成像具有高特异性、高灵敏度、可定量测量微环境变化和分子间相互作用、不受探针浓度、激发光强度和光漂白影响等优点。荧光寿命成像(FLIM)对细胞信号传导及调控,蛋白间的相互作用等生物研究发挥着很大作用。利用荧光寿命成像显微镜技术可实现可以实时监控发光纳米颗粒在活细胞内的稳定性。在过去的十年中,光学技术硬件和软件、材料科学和生物医学的迅速发展,共同促进了FLIM技术及其应用的巨大进步。

分子的荧光寿命在几纳秒至几百纳秒之间,因此,测量荧光寿命成像需要极快响应时间的探测器。如今主要存在两类方案:一是时域测量,由一束窄脉冲将荧光分子激发至较高能态S1,接着测量荧光的发射几率随时间的变化。典型的时域测量方法有TCSPC和时间门(TG)两种。TCSPC利用快速秒表测量激发脉冲与探测荧光之间的时间差。使用高重复脉冲激发光激发样品,在每一个脉冲周期内,较多激发荧光分子发出一个光子,然后记录光子出现的时刻,并在该时刻记录一个光子,再下一个脉冲周期内也是相同的情况,经过多次计数可以得到荧光光子随时间的分布曲线。相似的,TG则探测不同时间窗口内的荧光强度,通过曲线拟合得到荧光寿命。二是频域测量,对连续激发光进行振幅调制后,分子发出的荧光强度也会受到振幅调制,两个调制信号之间存在与荧光寿命相关的相位差,因此可以测量该相位差计算荧光寿命。荧光寿命成像可用于多种生物应用,包括组织表面扫描、组织类型绘图、光动力治理、DNA芯片分析等。

荧光寿命显微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是荧光寿命测量和荧光显微技术的结合,已普遍应用于生物医学研究和其他领域。FLIM具有高特异性、高灵敏度、可定量测量微环境变化和分子间相互作用、不受探针浓度、激发光强度和光漂白影响等优点。在过去的十年中,光学技术硬件和软件、材料科学和生物医学的迅速发展,共同促进了FLIM技术及其应用的巨大进步。尽管经过几十年的技术发展,FLIM技术在实际应用中仍然面临着一些挑战,例如:FLIM的成像分辨率也会受到光衍射的限制,因此,在实际应用中,我们经常需要在成像速度、图像质量和微环境寿命精度之间进行权衡。荧光寿命成像是什么样的技术?辽宁荧光寿命成像怎么操作

荧光寿命成像技术可显示单指数或多指数荧光衰减。吉林植物荧光寿命成像操作步骤

红外荧光寿命成像技术在生物多重检测中的应用。相比于荧光强度,荧光寿命的数值具有很好的稳定性,不依赖于生物组织穿透深度。因此可以实现生物多重成像和量化诊断。该团队利用能量延迟方法并结合对发光离子浓度的调控,实现NIR-II区单一波长下荧光寿命三个量级以上的精确调节。将这种成像方法应用于乳腺的精确诊断,其对标志物的定量检测结果与传统的免疫印迹法和免疫组织化学法相比有很好的一致性。而相比于后两者一次只能对一种标志物进行检测,这种新的时间维度成像方法可以原位实现同时定量多个标记物,并且减少了传统检测方法在组织切片的制作、处理以及评分过程中所导致结果的差异性。吉林植物荧光寿命成像操作步骤

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