江苏GFP-LC3单荧光自噬慢病毒包装

时间:2023年02月04日 来源:

人参皂苷Rb1代谢产物K通过产生ROS,激huoJNK,诱导HCT-116细胞自噬和凋亡。另外,白藜芦醇通过诱导ROS激huo的自噬途径诱导HT-29细胞凋亡,其亦可诱导HCT116细胞凋亡,通过增加LC3-II蛋白的量诱导自噬,但联合自噬抑制剂可增强白藜芦醇诱导的HCT116细胞凋亡。前列腺ai是男性很常见的恶性中流之一。中药水鬼焦的化学成分之一水鬼焦碱可诱导DU145和LNCaP细胞凋亡,同时诱导雄ji素非依赖的前列腺aiDU145细胞发生自噬性死亡,而LNCaP细胞中没有观察到自噬相关指标,提示水鬼碱诱导的DU145细胞自噬可能具有雄ji素依赖性。另外,胡椒中主要的活性成分之一胡椒碱给药24 h后通过增加LC3B-II蛋白的量和阳性荧光点,诱导LNCaP和PC-3细胞自噬,抑制细胞增殖,使细胞阻滞在G0/G1期。在自噬过程中,通过压力诱导自噬后,细胞质物质被自噬体的双膜结构隔离。江苏GFP-LC3单荧光自噬慢病毒包装

药物分子的自噬促进作用可以是其调整某种疾病的功效所在,例如雷帕霉素在调整克罗恩病等场合进入临床应用,其功能可能有一部分是通过促进自噬来实现的。但另一方面,由于自噬对病细胞的保护作用,某些药物促进自噬的作用可能导致病细胞对其出现耐药性。例如,依维莫司和索拉菲尼作为新型抗病药,其化疗效果主要是通过阻止mTOR来阻止病变细胞过于活跃的代谢,但阻止mTOR导致的自噬上调会抵消一部分该药物的杀伤力。又例如,表皮生长因子受体(EGFR)阻止剂,如厄洛替尼(Erotinib),是一类新型靶向抗病药物,但阻止EGFR也可诱导自噬上调,从而导致病变出现耐药。针对这一问题,已有临床试验将依维莫司/索拉菲尼/厄洛替尼与自噬阻止剂联用,以达到较大化药效的目的。吉林mRFP-GFP-LC3双荧光自噬慢病毒大自噬是较为主要的自噬通路,负责将细胞质内物质通过中间双重细胞膜囊泡传输至溶酶体。

电镜作为自噬检测的金指标。由于自噬体属于亚细胞结构,普通光镜下观察不到自噬体的形成,因此,直接观察自噬体需在透射电镜下。Phagophore的特征为:新月状或杯状,双层或多层膜,有包绕胞浆成分的趋势。自噬体(AV1)的特征为:双层或多层膜的液泡状结构,内含胞浆成分,如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体(AV2)的特征为:单层膜,胞浆成分已降解。WB检测标志物LC3/Atg8、p62/SQSTM1、Lamps、Atg5、Atg14和Beclin-1;

组织蛋白酶Cathepsin活力检测; 

IF检测自噬潮autophagic flux。

在抗中流zhiliao过程中, ai细胞的生死存亡不仅取决于自噬活性, 还与抗中流药物的作用机制有关。Gump等近期发表的研究发现, 经流式细胞技术分选的高自噬水平和低自噬水平的HeLa细胞 (人子宫颈ai细胞), 用抗ai药物TRAIL和Fas配体进行处理, TRAIL处理之后, 高自噬水平的细胞存活率更高; 而Fas配体处理后, 低自噬水平的细胞却显现出更高的生存率。在TRAIL处理后, 高自噬水平的细胞降解了被药物激huo的半胱天冬酶-8 (Caspase 8), 从而阻断了致死的通路; 而在Fas配体处理后, 高自噬水平的细胞却降解了FAP-1蛋白, 使得细胞对Fas配体更加敏感, 促进中流细胞死亡。由于自噬体膜形成过程中需要LC3,因此通过标记LC3可以识别自噬体。

什么是自噬?简单来说,细胞自噬,就好像一台电脑,用时间长了,出问题了,而断食引发的细胞自噬,就像是给它重装系统,让它焕然一新。自噬(Autophagy),希腊语“auto”(自我)和“phagein”(进食),直接翻译过来就是,自己吃自己。从专业上说是,细胞溶质的成分被降解,然后通过溶酶体(细胞里面有一个专门的小隔间,里面有消化蛋白质,碳水,和脂肪的酶,专门管这个小隔间叫做溶酶体(lysosome)),回收细胞中损坏的元件,循环再利用,组成一个新的细胞。Hhcy小鼠在脑缺血后,脑组织中同型半胱氨酸(Hcy)水平增加,激huo细胞自噬。细胞自噬GFP-LC3B

锦灯笼的有效成分酸浆苦素A可上调Beclin-1、LC3蛋白表达诱导黑色素中流细胞A375-S2自噬。江苏GFP-LC3单荧光自噬慢病毒包装

在活性氧类(reactiveoxygenspecies,ROS)、营养缺乏、细胞衰老、缺氧和缺血等刺激下,细胞内线粒体受损,线粒体形态和功能发生改变,因此被自噬蛋白特异性包裹并被溶酶体降解。在心脏缺血缺氧性疾病、高xue压及大血管疾病中,线粒体自噬可以修复因缺氧、缺血及损伤等所致的线粒体结构和功能的改变。心肌细胞的正常工作需要线粒体的氧化功能,适当的线粒体自噬对心肌细胞具有保护作用,然而过度的线粒体自噬则会导致细胞内线粒体过度清chu,影响线粒体的氧化功能,从而导致心肌细胞无法正常工作,进而加重心肌细胞损害。江苏GFP-LC3单荧光自噬慢病毒包装

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