珠海BD单细胞测序

时间:2022年09月01日 来源:

单细胞测序实验再样本细胞上机分选签,需要对细胞数量、细胞活性进准判断,这对SingleCell分选标记、建库、下机数据的质量都具有着决定性的作用。如若细胞计数偏高,将会影响建库的成功率;计数偏低,则会提高双细胞的比例;而细胞活率过低,就会使测序数据的利用率大打折扣,因此把好单细胞悬液质量这一关尤为重要。而在铺板过程中,由于不同操作人员手法具有不可避免的差异,不同的液体流速将直接影响单细胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody单细胞分选平台配套了专门定制的电动移液器,其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多种操作模式,来对应各种不同的操作。通过已经设定的程序来控制液体的流速,大幅度降低人为操作习惯带来的差异,保证实验操作的一致性。烈冰科技成立10余年,为科研学者提供专注的测序数据分析服务。珠海BD单细胞测序

针对单细胞测序的细胞上样数,为什么不建议捕获到的细胞数量越高越好?一味地追求高数量的细胞捕获可能会存在一些问题。例如在上机细胞悬液浓度固定时,如果目标细胞捕获数增加到8000甚至10000,上样细胞悬液体积势必增加,在细胞悬液质量不是很理想(细胞活性5%、结团率均>5%)的情况下,引入的背景信号会增加,分析结果不理想的直接体现包括:cell、non-cell无法有效区分和Fractionreadsincells偏低。当cell和non-cell无法有效区分时,会使得数据出现假阳性和假阴性结果!当目标细胞捕获数很大时,多细胞率会增加,数据分析时,此部分“cell”表现为基因检测数和UMI检测数是正常cell的N倍(N是一个GEM包裹的细胞数),导致所有细胞的统计数据(单个细胞基因检测中位数、单个细胞UMI检测中位数)虚高。此部分“cell”虽然可以通过设置数据分析阈值进行过滤,但是容易会有此类数据的残留和正常高基因检测细胞的人为去除!西安BD VDJ单细胞测序服务深度的单细胞测序数据解读助力医疗健康大时代。

如在现有研究方法基础上,进行特定亚细胞区域的蛋白质组学、相互作用蛋白质组学以及某种特定翻译后修饰类型的蛋白质组学的研究等。这将有助于诸多生化过程以及致病机理的全新认识与发现。随着基于单细胞蛋白质组学质谱研究方法的不断发展,单细胞分析方法的灵敏度、蛋白质的覆盖度、细胞通量、空间分辨率以及多组学的兼容能力会不断突破我们的认知极限。更重要的是,单细胞分析在临床诊断、疾病分型以及细胞发展机制这些重大生命科学领域方面的应用将会越来越大。

烈冰生物单细胞测序服务体系,不仅提供10XGenomics和BDRhapsody两大国际认可的单细胞实验平台,在“附加”产品上,我们提供BDFACSMelody流式细胞仪,满足您对特殊细胞类型的富集需求,自主研发的Panocell单细胞捕获芯片,可兼容BD平台全套原装磁珠、试剂和protocol,为您提供完整的单细胞多组学解决方案。从细胞多样本分析和染色所需的试剂到检测试剂盒,生物信息分析工具,和在线大数据分析系统、精简方案和专业团队技术支持,烈冰生物可为您提供用于单细胞多组学甚至到空间转录组测序的各种工具,助您加速科研探索之旅。烈冰科技已建立了多种国际和国内主流的高通量测序实验平台和自主研发国产化实验平台。

现有的单细胞测序技术阵营在几个主要领域存在差别。一个是基于微流控通道的细胞与Beads的在通道内的动态结合,通过油相水相不相容的特点将结合了的细胞和Beads进行分隔,在这个空间,单个细胞的内容物释放,转录本或其他生物分析物被标记或添加索引,以便下游识别。BDRhapsody单细胞测序平台采用静态微孔技术(Cyto-Seq具有类似的技术原理)。通过微孔板的物理分隔,将一个个单个细胞和带有标签的磁珠,一对一的“框”在微反应的物理平台中。这样,每一个细胞都会结合一个磁珠,那么在每一个磁珠中上长满了不同的CellBarcode和UMIBarcode连接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,这个抓手就会使用oligodT抓住mRNA构建文库。十二年测序经验,烈冰生物单细胞多组学领域的佼佼者。西安BD VDJ单细胞多组学测序

搭建多种测序数据的生物信息分析平台,5000+项目检验,真实可信赖。珠海BD单细胞测序

烈冰生物BDRhapsody平台,采用精简的工作流程助力您的实验成功:1.制备单细胞悬液:可使用碧迪医疗单细胞多样本分析试剂盒和/或BDAb-seq寡核苷酸偶联抗体(Ab-Oligos)将细胞染色2.微孔板预充和处理:使用自动移液器进行液体交换3.单细胞捕获工作流程:(1)细胞上样:上样575微升细胞悬液;系统未采用微流体通道设计,无需担心通道堵寨;通过重力轻轻沉淀细胞,可捕获脆弱细胞,BDRhapsody微孔板包含大于220,000个分区,可在低双细胞率下捕获多达40000个细胞(2)细胞上样扫描:估算捕获的活细胞数量和细胞多态率(3)磁珠上样:微孔的正六边形几何形状和尺寸可防止磁珠多重分配在微孔中(4)磁珠上样和磁珠洗涤扫描:估算包含活细胞和磁珠的微孔数量;测定细胞存留率,评估是否发生细胞损失(5)细胞裂解:使用裂解缓冲液,确保细胞完全裂解(6)磁珠回收:轻松、高效地磁性回收磁珠并采用Scanner扫描磁珠回收情况珠海BD单细胞测序

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