无参转录组高通量测序技术

台盼蓝染色原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果：明场（细胞未染色）：主要可以观察悬液背景质量（背景干净，无杂质碎片，无细胞团块）；台盼蓝场（细胞与台盼蓝染色后）：主要可以观察活性（主要为活细胞，未染色蓝色的为活细胞）；通过台盼蓝场计算活率：90%>80%；细胞浓度:710cells/µl;等结果来看，血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准，属于高质量单细胞悬液。 Illumina HiSeq2500/4000 可以运行PE150/PE250模式。无参转录组高通量测序技术

单细胞测序是什么？单细胞测序是基于高通量测序（Next-generationsequencingtechnology，NGS）方法，检测群体中单细胞基因组、单细胞转录组、单细胞表观基因组及单细胞蛋白组，提供细胞间差异的高分辨率视图，从分子水平揭示细胞奥秘。单细胞转录组测序（Single-cellRNA-Sequencing，ScRNA-Seq）指在单细胞水平上对mRNA进行高通量测序和分析的技术。单细胞转录组测序能获得单个细胞内近万个基因的表达信息，为辨别生物组织中各种细胞类型的转录组特征和全方面揭示细胞之间基因表达的异质性提供了有力的工具[3]。说到细胞异质性（Cellheterogeneity)，就要说到我们为什么要用单细胞测序技术了。上海18s高通量测序NGS生工生物已开展10x单细胞转录组测序（scRNA-seq）服务，如果正好您有需要，那就快快来call我们吧！

使用显微镜进行悬液质检操作时应注意：1.使用血球计数板时，可以提前镜检观察每小格计数室内是否洁净无杂质。若有杂质灰层，则需要多次清洗，直至计数室洁净无瑕；2.质检前将悬液轻微震荡或使用扩口***头吹打混匀；3.台盼蓝染色后需要尽快完成细胞计数，一般建议不要超过10分钟；4.如果方格中细胞数目过多，难以数清，应当对细胞悬液进行稀释以便于计数；5.对于压在方格界线上的细胞应当计数同侧相邻两边上的细胞数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。

全转录组测序（Total RNA-Seq），项目介绍：全转录组是指特定细胞在特定状态下所能转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA（non-coding RNA）。针对非编码RNA的研究主要集中在具有调控作用的miRNA，lncRNA和circRNA。基于二代测序技术的全转录组测序研究，同时分析同一样本中的mRNA，lncRNA，circRNA和miRNA，并且通过关联分析，使研究内容更加系统化，致力于深入挖掘生命现象背后的转录调控问题。组织样品或者总 RNA， 样品名称清晰，干冰运输。高通量测序技术是可以平行对数百万甚至数十亿条序列测序的技术。

生工高通量测序样品要求，组织/细胞样品：请使用新鲜取样的实验材料，当场分成小块后立即用液氮或干冰乙醇速冻，保存于-80°C冰箱，用足量的干冰（根据经验，在秋冬季节，如果打包合适，3公斤块状干冰可以维持30-40小时）寄送;于微生物样品，请客户如实声明所属物种，对于可能致病的微生物，生工保留拒收的权利;对于需要进行RNA抽提的样品，可以但不建议将组织在液氮中研磨后用TRIzol悬浮后用普通冰袋寄送，具体情况请先取得沟通。寄送RNA样品请置于1.5 ml离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用Parafilm封口。单细胞测序高通量测序应用

DNA样品请用1.5 mL离心管装好并用封口膜封好，并安置于50 mL离心管内或其他类似容器里，并旋紧盖子。无参转录组高通量测序技术

微生物基因组重测序（有参）：目前越来越多的微生物基因组被解析出来了。从而使得科研工作者们可以对某些物种微生物进行进行物种进化、种群特征、选择压力等研究。利用高通量测序技术，对有参考基因组微生物进行多个体的基因组重测序，精细分析其与参考基因组的SNP、InDel、SV等变异信息。微生物基因组从头测序（无参）：对于不断分离培养微生物的客户来说，要确定一个菌株是否是新菌株或者新菌种，较快捷的办法就是，直接进行基因组测序。利用高通量测序技术，对这些基因组进行高深度测序，然后进行基因组组装，获得基因组的框架图或者精细图甚至是完成图。从而可以快速解析其基因组结构、基因功能、进化关系。无参转录组高通量测序技术

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