陕西研究外泌体mRNA测序

H.Valadi等发现，细胞之间可以通过外泌体中的RNA来交换遗传物质。这意味着细胞可以通过外泌体影响另外一个细胞，甚至可以把自己的基因强加给另外一个细胞。研究人员逐渐对小小的外泌体产生了极大的好奇。他们发现，tumour细胞的外泌体与正常细胞的外泌体之间存在差异，tumour的外泌体会促进tumour的生长和转移，tumour周围组织细胞分泌的外泌体具备杀伤tumour细胞的能力，等等。2013年的诺贝尔生理或医学奖颁给了三位科学家，他们分别是美国科学家James E. Rothman和Randy W. Schekman，德国科学家Thomas C. Südhof，以表彰他们发现细胞内部囊泡（外泌体等）运输调控机制。使外泌体的研究达到全新的高度。就外泌体的研究方向而言，干细胞、免疫、microRNA、靶向给药、ai症的诊断及医治等都是热门研究领域。免疫磁珠法：可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单，但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。陕西研究外泌体mRNA测序

外泌体的提取方式： 1、离心法：此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足。 2、过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样纯度不足。 3、密度梯度离心法：用此种方法分离到的外泌体纯度较高，但是前期准备工作繁杂 4、免疫磁珠法：这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单，但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。 5、色谱法：此种方法分离出的外泌体大小均一，但设备特殊，应用不普遍。外泌体可被大多数细胞分泌，并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分。中国台湾测序外泌体外泌体在病毒和朊蛋白等多种病原体之间起着独特的作用。

外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。2007年， Valadi等发现鼠的肥大细胞分泌 的 exosom e可以被人的肥大细胞捕获，并且其携带的mRNA成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质，不但是mRNA，exosomes所转移的microRNA同样具有生物活性，在进入靶细胞后可以靶向调节细胞中mRNA的水平。这一发现使得研究人员对exosome的研究热情激增，截止目前已经通过286项研究发现了41860种蛋白质、2838种microRNA、3408种mRNA。外泌体可被大多数细胞分泌，并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不但包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分。

MSCs是干细胞家族的重要成员，属于多能干细胞，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。人间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，还能向受损组织趋化。MSCs通过旁分泌方式释放细胞因子，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器guan损伤修复，是一种有前景的能够用于疾病医治的干细胞来源。RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。

目前，外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。超速离心：耗时耗力，往往需要8-30个小时；每次较多只能处理6个样品；需要大量的起始材料；产量不高。需一台超速离心机。将欲提取的细胞培养上清液10ml，在4℃的环境下，300×g10min，2000×g20min，弃沉淀，去除细胞；然后l0,000×g30min，弃沉淀，去除亚细胞成分；再用10,000×g60min，弃掉上清液，较后所得沉淀既为exosome，用30mlPBS溶液重新悬浮沉淀物，混匀后再以10,000×g60min，用lmlPBS溶液悬浮沉淀物提纯的exosome溶液分别装入eppendorf管内，置于-80℃冰箱内保存备用。外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。西藏云序外泌体全转录测序

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中。陕西研究外泌体mRNA测序

多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。 所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。陕西研究外泌体mRNA测序

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