广东m7G环状RNA研究

研究思路：本文首先基于高通量手段比较了小鼠中LT-HSC，ST-HSC和MPPs中全转录组变化，共发现156种明显性差异表达的circRNAs。表达量验证证实9个circRNA在LT-HSC中明显性上调。在细胞表型层面，发现只有干扰D430042O09Rik转录的circRNA——Cia-cGAS后，可明显改变造血干细胞的亚群分布，作者因此锚定Cia-cGAS进行机制分析。作者通过Cas-9基因敲除策略成功构建了Cia-cGAS基因敲除小鼠，在Cia-cGAS基因敲除小鼠中LT-HSC明显性减少，I型IFN表达升高。通过RNAPull-down实验，作者发现Cia-cGAS可以与cGAS结合，cGAS-RIP实验反向证实二者之间具有直接的相互作用。后续，作者通过生信预测结合EMSA实验分析了Cia-cGAS与cGAS相互作用的位点信息。酶学研究证明，Cia-cGAS可通过结合cGAS并抑制其活性。具有高度保守性，部分具有快速的进化性改变。广东m7G环状RNA研究

ac4CRNA乙酰化是在RNAac4C修饰酶的作用下，使N4位乙酰胞嘧啶发生乙酰化的一种保守的化学修饰（N4-acetylcytidine）。早期研究发现该修饰存在于真核生物中丝氨酸及亮氨酸tRNA和18SrRNA上，导致Watson-Crick碱基热稳定性增加，调控蛋白合成中的编码准确性；近期研究发现ac4C分布在人类转录组中，大多数位点出现在编码序列（CDS）内，并且通过改善的mRNA稳定性和翻译促进靶基因表达。目前，ac4CRNA乙酰化修饰作为一类新型RNA修饰，是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点和“超级潜力股”！宁夏ac4c环状RNA研究环状RNA(circular RNA，circRNA)是新发现的一类新型非编码RNA分子。

研究指出，环状RNA能够调控来源基因的表达。为了进一步了解小麦差异表达环状RNA的功能，研究人员对它们的来源基因进行GO(GeneOntology)分析。结果显示在脱水作用下，差异表达的环状RNA的来源基因可能在不同的生物进程和分子功能方面发挥作用。2013年两篇Nature文章揭示环状RNA具有miRNA海绵的功能，它可以吸附miRNA来调节基因的表达。研究人员对不同样本之间差异表达的62种环状RNA进行靶miRNA的结合预测。发现其中6种环状RNA具有潜在的miRNA结合位点。随后，研究人员对这些miRNA下游靶基因进行功能预测，分析结果显示靶基因参与的信号通路都与脱水应激反应相关，暗示着这6种差异表达的环状RNA可能通过miRNA海绵机制发挥作用。

从环状RNA结合功能蛋白角度，成功的向我们展示了核内circRNA具有重要生理功能，以及该类型circRNA的研究方法。首先通过高通量测序筛选与造血干细胞干性维持相关的circRNA分子，围绕该分子设计一系列体内、体外干扰实验，确定其可引起干细胞干性维持相关细胞表型改变。后续，与circRNA海绵机制研究类似，RNAPullDown实验及RIP实验成为机制研究成功与否的关键钥匙。作者基于RNAPull-down技术筛选到可能与Cia-cGAS相互作用的蛋白质，并进一步通过RIP实验反向验证。circRNA分子呈封闭环状结构，不易被核酸外切酶RNaseR降解，比线性RNA更稳定。

研究二：环状RNA分子细胞表型作者发现Cia-cGAS是由D430042O09Rik的4、5、6号外显子连接成环。且位于外显子上下游的内含子区域具有成环所需高度同源序列。作者通过Cas9技术手段，敲除一端同源序列后，成功获得Cia-cGAS敲除小鼠模型。敲除小鼠中LSK祖细胞明显增多，LT-HSC明显减少，且基因敲除小鼠出生6个月后会死于贫血。对基因敲除小鼠中LT-HSC进行BrdU染色，结果说明敲除小鼠中LT-HSC细胞处于增殖分裂活跃期。同时脉冲标记H2B-GFP小鼠模型证实Cia-cGAS敲除后，静息状态的LT-HSC细胞比例明显降低。环状RNA可通过RNA介导间接与蛋白质发生关联。广东环状dna

目前发现的circRNA主要来源于基因外显子。广东m7G环状RNA研究

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