全基因组甲基化检测

m1A RNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化，即RNA分子腺嘌呤第1位氮原子上的甲基化修饰（N1-methyladenosine，m1A）。研究表明，m1A是真核生物tRNA和rRNA丰度很高的一种转录后修饰，近期研究也表明m1A修饰可调控mRNA翻译。m1A修饰作为一类新型RNA甲基化，其功能和机制都亟待挖掘。 与m6A RNA检测方式一致，针对m1A修饰也采用MeRIP-seq技术，抗体富集的技术原理如下：将m1A RNA甲基化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育，抓取有甲基化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照（Input）样本，对照样本为未进行IP反应的RAN片段，对照样本用于消除非特异性抓取甲基化片段的背景。除了拟南芥，在其他植物中如番茄、小麦、玉米以及高粱等均发现了RNA m6A甲基化修饰。全基因组甲基化检测

技术原理 为了系统性揭示RNA O8G氧化修饰，云序生物提供了成熟的 RNA O8G氧化MeRIP-Seq技术服务。技术原理如下：将RNA O8G氧化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育，抓取有O8G氧化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照（Input）样本，对照样本为未进行IP反应的RNA的片段。对照样本用于消除非特异性抓取O8G氧化片段的背景。对比免疫共沉淀IP样本和Input样本中的序列片段，将O8G氧化修饰位点定位到转录组上，并根据RNA-seq数据，计算样本中O8G氧化程度。 配合专业的生物信息学分析，云序生物可进一步提供高精度的O8G氧化图谱，帮助客户揭示O8G氧化在生物学功能和潜在的作用机制。dna 去甲基化反应Nature正刊发表文章，证实发生m6A RNA甲基化修饰可以调控mRNA稳定性。

在本研究中，作者对两个玉米(Zeamays)自交系转录组范围内的m6AmRNA分布和多聚体分析进行了平行分析，以评估m6A修饰与翻译状态的整体相关性。m6A位点普遍分布于数千个蛋白编码基因中，局限于一个共识基序内，主要富集于3’UTR区，且m6A修饰在调节替代聚腺苷酸位点的选择中发挥作用。更重要的是，m6A修饰根据其强度和基因位置显示了与翻译状态的多方面相关性。此外，在m6A修饰中观察到大量的种内变异，这种自然变异部分是由基因特异性表达和选择性剪接驱动的。总之，这些发现为鉴定玉米中受m6A修饰的转录本提供了宝贵的资源，并为更好地理解m6A在介导基因表达调控中的自然变异铺平了道路。

案例3：拟南芥m5C RNA甲基化谱及TRM4B酶对根的影响 原文：Transcriptome-Wide Mapping of RNA 5-Methylcytosine in Arabidopsis mRNAs and Noncoding RNAs 期刊：The Plant Cell 影响因子：8.23 与上篇不同，本研究团队采用m5C RNA甲基化测序研究拟南芥中m5C甲基化谱，在种子，幼芽，根中发现了1000多个特异性的位点。敲低RNA m5C甲基转移酶TRM4B，造成tRNA稳定性的降低。研究人员还证实TRM4B突变体的初级根比野生型更短，同时对氧化的应激反应更敏感。m6A 修饰就是真核生物 mRNA 中较常见存在的一种修饰形式，得到了常见的关注和研究。

原文：METTL4 catalyzes m6Am methylation in U2 snRNA to regulate pre-mRNA splicing 期刊：Necleic Acids Research 影响因子：16.48 新加坡南洋理工大学的研究人员通过人类全转录组 RNA 甲基化测序，在 Mettl4 敲除组与野生型对照组之间寻找出 m6Am 相对甲基化水平的差异位点，其中 U2 snRNA 的第 30 位 RNA 残基有明显的 m6Am 修饰水平差异。进一步的 FLAG-tag 融合蛋白实验证明，METTL4 蛋白直接催化了 U2 snRNA 上的 m6Am 甲基化修饰的发生。METTL4 过表达实验发现，其催化的 RNA 内部 m6Am 修饰位点具有 HMAGKD 的序列 motif 特征（H=A/C/U, M=A/C, K=G/U, D=A/G/U）。 在 Mettl4 敲除的人类细胞中，因为 U2 snRNA 无法完成 m6Am 修饰，故而对 snRNA 的 pre-mRNA 剪接功能产生了诸多影响。近两年高影响因子文章不断，是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点。新疆甲基化差异

对m6A RNA甲基化，目前流行的检测手段为m6A-Seq技术，适用于m6A RNA甲基化谱研究。全基因组甲基化检测

m5C RNA是近年来发现的一类在tRNA及rRNA高丰度存在的甲基化修饰。利用高通量测序手段验证了非编码RNA以及部分mRNA中m5C存在，但是在不同物种、不同组织中m5C修饰分布图谱尚没有系统性报道。云序生物率先开展m5C RNA甲基化测序服务，采用经典重亚硫 酸盐处理的方式进行测序。在全转录范围内及tRNA水平查看基因m5C甲基化修饰水平。 通过高通量测序和生物信息分析，识别甲基化富集的基因组区域。 富集峰识别后，得到的是一堆基因组位置信息，通过生物信息分析利用邻近基因对富集峰进行注释，并根据峰中点相对于已知基因的位置，将富集峰为启动子峰、上游峰、内含子峰、外显子峰、基因间峰。 全基因组甲基化检测